小鼠甲状腺来源间充质干细胞的生物学特性研究

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1、分类号：R725.8学校代码：10062密级：学号：2012602690硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：小鼠甲状腺来源间充质干细胞的生物学特性研究TITLEThebiologiccharacteristicsofmesenchymalstemcellsderivedfrommousethyroid一级学科：临床医学二级学科：儿科学论文作者：倪永青指导教师：郑荣秀教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月分类号：R725.8学校代码：10062密级：学号：2012602690学位类

2、别：科学学位□√专业学位学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：小鼠甲状腺来源间充质干细胞的生物学特性研究TITLEThebiologiccharacteristicsofmesenchymalstemcellsderivedfrommousethyroid一级学科：临床医学二级学科：儿科学论文作者：倪永青指导教师：郑荣秀教授导师组成员：张毅教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究

3、成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书

4、。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日中文摘要目的：探索小鼠甲状腺来源间充质干细胞的生物学特性，比较其与骨实质来源间充质干细胞是否具有差异，为临床研究自身免疫性甲状腺炎的发病机制提供理论与实验依据。方法：1、采用组织贴壁培养法，体外无菌分离并培养C57BL/6小鼠甲状腺来源间充质干细胞（ThyroidderivedMesenchymalStemCells，TMSCs），以小鼠骨实质来源间充质干细胞（BoneessencederivedMese

5、nchymalStemCells,BMSCs）作对照，通过倒置显微镜观察贴壁细胞形态，然后利用不同诱导剂诱导贴壁细胞向成脂肪、成骨分化，油红O染色检测成脂分化能力，碱性磷酸酶及VonKossa染色检测成骨分化能力，Q-PCR检测相关成脂肪和成骨关键转录因子的表达。进一步，采用CCK8法检测贴壁细胞生长曲线，流式细胞仪检测细胞表型和细胞周期。2、在获得小鼠甲状腺来源MSCs的基础上，采用淋巴母细胞转化实验（Lymphocytetransformationtest，LTT)和混合淋巴细胞反应（MixedLym

6、phocyteReaction，MLR)检测MSCs对T细胞增殖的免疫抑制功能。进一步，将甲状腺来源MSCs与DC共培养，倒置显微镜下观察DC形态改变，流式细胞术检测DC表面抗原的表达，Q-PCR法在mRNA水平检测促炎因子IFN-γ、TNF-α和IL-12的表达水平。3、建立异体鼠尾皮瓣移植模型，检测甲状腺来源MSCs体内免疫调节及修复受损组织的能力。将小鼠甲状腺来源MSCs通过尾静脉输注模型小鼠体内，每日观察移植皮瓣炎症反应程度和愈合情况，第7天行病理学检测移植皮瓣组织淋巴细胞浸润程度。结果：1、从小

7、鼠甲状腺和骨实质组织中均可培养出贴壁生长的成纤维样的细胞，流式细胞仪检测相关细胞表型，两种细胞均阳性表达CD29、CD140、CD105和Sca-1，而不表达CD34、CD45、CD31、CD11b和MHCII。进一步，将细胞向脂肪和骨I细胞诱导分化，结果显示，细胞可被诱导成脂肪，油红染色可见有大量脂滴出现，Q-PCR检测可见脂肪分化关键转录因子C/EBPα和PPARγ的表达；成骨诱导分化后，碱性磷酸酶染色可见碱性磷酸酶活性增高，VonKossa染色可见钙化骨结节形成，Q-PCR检测可见成骨关键转录因子R

8、unX2和Osteocalcin的表达，说明成功获得小鼠甲状腺来源MSCs。利用CCK8法检测甲状腺来源MSCs的生长特性，结果显示，细胞呈S型曲线生长，流式细胞术检测细胞周期，可见80%以上细胞分布在G0/G1期,提示获得的贴壁细胞符合干细胞的生长特性。2、在获得TMSCs的基础上，针对MSCs独特的免疫调节功能进行LLT和MLR检测。LTT检测TMSCs对ConA刺激的T淋巴细胞增殖能力的影响，结果表明，TMSCs可有效抑