不同供者来源脐带间充质干细胞生物学特性差异的初步研究

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1、万方数据北京协和医学院中国医学科学院同等学力申请硕士学位硕士学位论文不同供者来源脐带间充质干细胞生物学特性差异的初步研究所院：姓名：指导教师：导师小组：学科专业：研究方向：完成日期：输血研究所王荣陈强研究员陈强宋宁田力免疫学脐带间充质干细胞生物学特性2014—9学校代码：10023学号：ZS2013047万方数据北京协和医学院中国医学科学院目录‘IIJlIIIIIIIIXJIIMPllllJPIIIIPIIIIJ。Y2723542中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．8月U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．31结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41发表文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47获得专利⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯48致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53独创性及论文版权使用授权书⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54万方数据、北京协和医学院中国医学科学院中文摘要目的：体外分离、培养人脐带间充质干细胞(UmbilicalCordderivedmesenchymalstemcells，UC．．MSCs)，并检测细胞表面标志物CD309(血管内皮细胞生长因子受体2，VEGFR2，Flk-1)的表达，细胞分泌肝细胞生长因子(HGF)和前列腺素E2(PGE2)的量，分别分析它们与供者信息：产妇年龄、孕周、胎儿体重和性别的相关性。方法：无菌条件下收集健康胎儿脐带，采用组织块贴壁法分离培养uC_．Mscs，并进行传代培养。观察

4、细胞形态，细胞计数仪检测收获细胞数量，绘制生长曲线，流式细胞仪检测免疫表型，成骨成脂诱导分化鉴定。流式细胞仪检测培养的82份Pl代细胞表面标志物CD309表达。随机抽取15份UC__MSCs传代培养至Pll代。ELISA法分别检测P1、P3、P5、P7、PIO和Pll代UC-_MSCs培养上清中细胞因子HGF和PGE2的含量。随机抽取28份UC_-MScs扩增培养，P2代细胞接种后培养48小时收获，细胞计数仪检测细胞数量，分析细胞增殖能力和供者信息(产妇年龄、孕周、胎儿体重、性别和分娩方式)的相关性。乒上田多日木：培养的脐带间充质干细胞贴壁生长，呈梭形或纺锤形，传代细胞形态均一，可连

5、续传至15代以上。通过检测原代，P3代，PIO代细胞在不同生长时问细胞增殖量，绘制出生长曲线。P1代、P3代和P7代uC．_Mscs的细胞表型均为CD90+／CDl05+／CDl66+／CDl4一／CD34一／CD45一／CD79a一／HLA—DR一。P3代细胞分别通过成骨和成脂诱导分化培养，诱导分化成骨细胞和脂肪细胞。不同供者来源UC—-MSCs的P1代细胞表面标志物CD309表达范围为0％一16．0％(n=82)，P1代细胞CD309表达率越高，其细胞增殖倍数越高。P3代上清中HGF和PGE2含量分别为26029±11680(pg／m1)、3046±841(pg／m1)(n=15

6、)，P5代上清中HGF和PGE2含量分别为11660±5137(pg／m1)、2396±569(pg／m1)(n=15)。从Pl代传代培养至P11代，细胞培养上清中HGF含量随传代次数降低，PGE2含量无显著性变化。扩增培养28份UC__MSCs获得细胞增殖倍数，分析发现：产妇年龄24—26岁组增殖倍数为4．39±1．15，比31—41岁组增殖倍数2．99±0．75高；男性胎儿增殖倍数为3．92±1．17，比女性胎儿增殖倍数3．03±0．87高；胎儿体重<3．5kg组增3万方数据北京协和医学院中国医学科学院殖倍数为3．89_+0．92，比>13．5kg组增殖倍数2．87±1．19高；

7、细胞增殖能力均是前者强于后者；孕周和分娩方式的不同细胞增殖能力无显著性差异。结论：本实验成功分离培养出人脐带问充质干细胞，并传代扩增。不同供者来源uC_J订SCs细胞表面标志物CD309表达存在差异，高表达CD309的UC-JllSCs细胞增殖能力更强。不同供者来源UC—MSCs分泌HGF和PEG2的量也有较大差异。随传代次数增加，细胞分泌的HGF量降低，P5代出现急剧下降，而PGE2量无明显变化。产妇年龄较小、胎儿体重较轻的男性胎儿的UC-_MSCs细胞