不同浓度地塞米松对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

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1、不同浓度地塞米松对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响：庞金辉，黄煌渊，张权，纪斌，曹成福【摘要】目的观察不同浓度地塞米松对体外培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs)成骨分化、增殖能力及凋亡率的影响。方法以梯度密度分离法获取人骨髓间充质干细胞进行体外培养，以1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6mol/L4种不同浓度地塞米松分别处理细胞。检测各组细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性；RTPCR法检测骨桥蛋白(OPN)基因的表达；四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定各组细胞的增殖率；流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果低浓度(1×10-9mol/L)地塞米松对ALP的表达无显著作用(P

2、>0.05)，而1×10-8mol/L及以上浓度的地塞米松可明显增加ALP的活性(P<0.01)；所有实验组的hMSCs均有OPNmRNA表达，其表达强度随着地塞米松浓度增加而增强；1×10-9mol/L地塞米松对细胞增殖无明显影响(P>0.05)，1×10-8mol/L及以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖(P<0.01)；体外培养的hMSCs凋亡率随地塞米松浓度的增加而升高(P<0.01)。结论1×10-8mol/L及以上浓度的地塞米松可显著增强hMSCs成骨分化能力，同时抑制细胞增殖并促进其凋亡。【关键词】间充质干细胞；地塞米松；碱性磷酸酶；骨桥

3、蛋白；细胞增殖；凋亡Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofdexamethasoneonthebiologicalcharacteristicsofhumanmesenchymalstemcells(hMSCs)derivedfrombonemarroaryhMSCsethasone(1×10-9,1×10-8,1×10-7and1×10-6mo1/L)．Thealkalinephosphatase(ALP)activityeasured；mRNAofosteopontinerasechainreaction(RTPCR);theprolife

4、rationofhMSCsinedeter.ResultsTreatmentofcellsethasone(1×10-8,1×10-7and1×10-6mo1/L)for8daysledtoasignificantincreaseinALPactivity(P<0.01)．TheosteopontinmRNAethasonerespectively．TheopticaldensityvalueofhMSCstreatedethasonefor6daysethasoneincreasedtheapoptosisrateofallhMSCsculturedinvitro．Concl

5、usionThehighconcentrationofdexamethasone(1×10-8,1×10-7and1×10-6mol/L)inducesthedifferentiationofhMSCstoosteoblasticcells,inhibitstheproliferationofcellsandleadstoanincreaseofitsapoptosisrate．Keyesenchymalstemcells；dexamethasone；alkalinephosphatase；osteopontin；cellproliferation；apoptosis骨髓间充质干细胞

6、(humanmesenchymalstemcells,hMSCs)是近年来骨组织工程和干细胞研究的热点种子细胞之一。目前已知，地塞米松可以诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞方向分化，但是地塞米松对骨髓间充质干细胞影响的系统性研究较为鲜见。本文探讨不同浓度地塞米松对体外培养人骨髓间充质干细胞成骨分化、增殖能力及凋亡率等方面的作用，旨在更深入地了解地塞米松对hMSCs生物学特性的影响。材料与方法1主要试剂DMEM培养基（Hyclone公司）、地塞米松（Sigma公司）、碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）定量检测试剂盒（Sigma公司）、AnnexinV凋亡检测试剂盒

7、（Bender公司）、TRIzol（Sigma公司）。2人hMSCs的体外培养与观察骨髓标本均取自无血液疾病或骨病的成年人，事先征得所有献髓者的同意。将抽取的红骨髓以磷酸缓冲液（PhosphateBufferedSaline，PBS）稀释制成悬液，小心叠加至淋巴细胞分离液之上，离心，收集呈云雾状的有核细胞层，接种于10%胎牛血清的DMEM培养液中，置于37℃，5%CO2及饱和湿度条件下孵育定期换液，待细胞生长至90%融合时，消化传代。随机抽取生长良好的细胞