甲基强的松龙对大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性的影响

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1、温，、I'1医学院硕二l：学位论文论文题目：甲基强的松龙对大鼠骨髓问充质干细胞生物学特性的影响答辩委员会主席：丑垫塑煎援答辩委员会成员：者垡勤投援垄重复锋圣峰论文答辩B期：年月日甲基强的松龙对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响目录英文缩略词中英文对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4论文摘要中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6论文正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3

2、3综述及参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34学位论文独创性声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43一二三四五六七英文缩写BMSCsMPPBSMTSALPOPN0CNBMP一2Q—MEMRT-PCRAR—SGCOP温州医学院硕’f：学位论文英文缩略词中英文对照表英文全称BonemarrowmesenchymalstemcellsMethylprednisolonePhosphatebufferedsaline3一(4，5)一dimethylthiahiazo(一Z—y1)·-3,5—-diphenytetrazoliumromideAlk

3、alinephosphataseOsteopontinOsteocalcinBonemorphogeneticproteins一2Q—modifiedEagle’SmediumReversetranscriptionpolymerasechainreactionalizarinredstainingGlucocorticoids-inducedOsteoporosis4中文全称骨髓间充质干细胞甲强龙磷酸盐缓冲溶液噻唑蓝碱性磷酸酶骨桥蛋白骨钙素骨形态发生蛋白一2(71一MEM培养基逆转录．聚合酶链反应茜素红染色糖皮质激素性骨质疏松甲基强的松龙对大鼠骨

4、髓间充质干细胞生物学特性的影响中文摘要目的研究不同浓度的甲基强的松龙(甲强龙)对BMSCs增殖、凋亡和成骨分化的影响，探讨其可能的机制。方法我们从4周龄雌性SD大鼠中获取骨髓细胞进行原代培养，并通过表面抗原和多能分化能力鉴定其为BMSCs。含不同浓度(10-5_10咱mol／L)甲强龙的培养液作用于BMSCs，通过MTS法检测甲强龙对BMSCs增殖的影响，通过hnnexinV／PI双染色法检测甲强龙对BMSCs凋亡的影响。不同浓度的甲强龙(10{-10咱mol／L)加维生素C和甘油诱导BMSCs成骨分化，21天后进行茜素红染色，并采用RT-PCR法

5、检测成骨相关基因(ALP、OPN、OCN和BMP一2)的表达情况。结果我们的原代细胞贴壁生长，CD29和CD90阳性，CD45和CD34阴性，而且这些细胞具有向成骨细胞、脂肪细胞分化的多向分化能力，表明提取的细胞属于BMSCs。我们研究还发现，高浓度的甲强龙(≥10。6mot／L)组中细胞相对增值率(ODmts)较对照组明显下降，细胞的生长抑制率(IR)明显升高，BMSCs细胞裂解坏死增加，数量减少，凋亡率明显升高，而低浓度的甲强龙(≤10—7moL／L)的ODmts、IR和凋亡率与对照组差异不大。10～oL／L、10—7moL／L甲强龙组茜素红染

6、色阳性，ALP、OPN、OCN和BMP一2表达量明显高于对照组(P0．05)。单独抗坏血酸和B一甘油磷酸诱导组茜素红染色阴性，ALP、OPN、OCN和BMP-2表达量与对照组比较没有明显差异。结论我们研究表明：1．高浓度甲强龙(≥10。6mol／L)能够明显抑制BMSCs增殖，并且显著促进BMSCs凋亡，而低浓度组作用变化没有显著差异，提示甲强龙对BMSCs增殖和凋亡的影响具有浓度依赖性。2．只有在浓度适当的条件下，

7、甲强龙可以诱导BMSCs成骨分化，而浓度过高或过低均不利于诱导成功。综合既往研究成果，我们发现甲强龙不仅在成骨细胞阶段影响骨形成，而且早在BMSCs阶段就已经发挥其影响，这提示甲强龙在BMSCs到成骨细胞这条通路上都有作用。关键词甲强龙；骨髓间充质干细胞；增殖；凋亡；成骨分化EffectofMethylprednisoloneonthebiologicalcharacteristicsofSDratsmesenchymalstemcellsderivedfrombonemarrowinvitroAbstractObjectiveToinvestig

8、atetheeffectsofvariousconcentrationofmethylprednisoloneontheb