抑制isl1的表达对胃癌细胞特性影响的研究

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1、中图分类号:R735.2编号:20100146承德医学院硕士研究生毕业论文抑制ISL1的表达对胃癌细胞特性影响的研究InhibittheofISL1expressionofgastriccancercellscharacteristicsinfluenceresearch研究生:张静导师:杜昱蕾副教授学科专业：肿瘤学所在部系：临床学院研究起止日期：2011年9月～2012年11月论文提交日期：2013年3月抑制ISL1的表达对胃癌细胞特性影响的研究InhibittheofISL1expressionofgastriccanc

2、ercellscharacteristicsinfluenceresearch研究生：张静学号:20100146年级：2010级导师：杜昱蕾副教授学科专业：肿瘤学所在部系：临床学院研究方向：抑制ISL1的表达对胃癌细胞特性影响的研究资助基金项目：国家自然科学基金资助项目(30800514)研究起止日期：2011年9月～2012年11月论文提交日期：2013年3月目录中文摘要…………………………………………………………………1英文摘要…………………………………………………………………5英文缩写……………………………………………

3、……………………10研究论文抑制ISL1的表达对胃癌细胞特性影响的研究引言…………………………………………………………………11第一部分下调ISL1的表达对胃癌BGC823特性的影响前言…………………………………………………………………12材料与方法…………………………………………………………12结果…………………………………………………………………22附图…………………………………………………………………24附表…………………………………………………………………26小结…………………………………………………………………27

4、第二部分富集BGC823侧群细胞，观察下调ISL1对其特性的影响前言…………………………………………………………………28材料与方法…………………………………………………………28结果…………………………………………………………………33附图…………………………………………………………………35附表…………………………………………………………………39小结…………………………………………………………………40讨论………………………………………………………………………41参考文献………………………………………………………………

5、…44结论………………………………………………………………………47综述………………………………………………………………………48致谢………………………………………………………………………57个人简历…………………………………………………………………59中文摘要抑制ISL1的表达对胃癌细胞特性影响的研究摘要胃癌是目前世界范围内最常见的消化道恶性肿瘤，其具有发病率高、死亡率高、早期诊断率较低，生存率低等特点。有许多研究表明，胃癌存在基因的表达异常，如P15、P53、FHIT、CD44等，但这些对于研究胃癌细胞特性及其耐药性方面

6、还远远不够。ISL1（胰岛素基因增强结合蛋白1）为转录调节因子——Islet-1，其对胰岛细胞成熟、增殖和分化都具有重要作用。我们前期有研究，通过高通量的实验技术，发现ISL1在胃癌侧群细胞中高表达。我们用RNA干扰的方法抑制ISL1在胃癌BGC823中的表达，来检测胃癌细胞的特性发生何种变化，为胃癌的治疗提供更好的理论依据。第一部分下调ISL1的表达对胃癌BGC823特性的影响目的：构建针对人胰岛素基因增强结合蛋白1（ISL1）的小干扰RNA，将小干扰RNA转染进BGC823细胞中，下调ISL1的表达，来检测胃癌细胞特性的

7、变化。方法：从NCBI数据库中获取人ISL1基因编码序列全长，利用siRNA设计软件设计1对干涉靶点和随机的不靶向任何基因的阴性对照。将小干扰RNA转染体外培养的人胃癌细胞系BGC823，逆转录酶链式反应（RT-PCR）和免疫印迹法（Western-blotting）等生物化学技术，检测ISL1基因的mRNA和蛋白表达水平的变化。并用MTT比色法测定细胞增殖。用CCK-8法检测细胞对化疗药物的敏感性。结果：1小干扰RNA序列：ISL1-siRNA序列为：5’-GCUCCAAGGUGUAUCACAUTT-3’（正义）5’-AU

8、GUGAUACACCUUGGAG-3’（反义）。阴性对照序列为：5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3’（正义）5’-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3’（反义）。-1-中文摘要GAPDH阳性对照序列为：5’-GUAUDACAACAGCCUCAAGTT-3’（正义