阿霉素对人胃癌细胞gstπ表达的影响

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1、阿霉素对人胃癌细胞GSTπ表达的影响作者：蒋丽娜张从胜齐效勇薄爱华张晓丽【摘要】目的：探讨阿霉素对人胃癌细胞的杀伤作用及致GSTπ表达的变化。方法：利用人胃癌BGC823细胞株，CO2培养箱进行培养过程中，加入阿霉素注射液继续培养5h或10h。然后用HE和免疫组化染色。光镜下观察并进行图象分析。结果：实验组BGC823细胞变形，GSTπ表达位置和灰度有明显变化。结论：阿霉素作用5h可对胃癌细胞有杀伤作用，使胃癌细胞形态和GST基因表达有明显变化。【关键词】阿霉素;胃肿瘤/细胞;谷胱甘肽s转移酶π;免疫组织化学【ABSTRACT】Objective:Tostudythekilli

2、ngfunctionofAdriamycintohumangastriccarcinomacellsanditsinfluencetotheexpressionofGSTπ.Methods：）;Stomachneoplasms/Cell;GSTπ;Immunohistochemical阿霉素（Adriamycin，ADM或Doxovubicin，DOX）又称多柔比星，是一类在临床上广泛使用的具有光谱高效抗癌活性的薏环类抗生素[1]，在多种癌瘤的化疗方案中可见到阿霉素，如治疗白血病、乳腺癌、肺癌及恶性淋巴瘤等的方案中。目前，人们对ADM的抗癌机制报道很多，但关于ADM对基因表达的影响

3、很少报告。为探讨ADM对谷胱甘肽s转移酶π（GSTπ）表达的影响，我们利用细胞培养和SP免疫组化的技术，观察了ADM对人胃癌BGC823细胞株GSTπ表达的影响，为深入认识ADM的作用途径和癌细胞耐药机制提供参考依据。1材料与方法1.1材料AMD由深圳市万乐药业有限公司生产，BGC823胃癌细胞株由北京肿瘤研究所提供。SP免疫组织化学试剂盒及鼠抗人单克隆抗体GSTπ、DAB显色剂由中杉金桥生物技术有限公司提供。1.2方法将5×104个cell/mL浓度的BCG823胃癌细胞，装入无菌96孔板中，置37℃5%CO2培养箱中培养24h，细胞贴壁爬片(盖玻片)，对照组不加AMD

4、培养,实验组加入ADM注射液15μL(含AMD0.0015mg)，然后继续培养5h或10h,取出贴壁细胞,4%多聚甲醛固定30min,然后用PBS(pH7.2)清洗,其中一片滴Ⅰ抗,室温过夜,常规SP法,Ⅱ抗、Ⅲ抗分别37℃孵育30min。阴性对照PBS代替I抗，阳性对照用已知胃癌阳性切片。1.3统计学处理利用彩色图象分析系统，每组计数50个阳性细胞检测其着色灰度，以灰度表示着色深浅（深者即含量高者灰度值低，浅者灰度值高说明含量越低）。通过SPSS软件分析，计算方差值，再进行独立样本t检验。2结果2.1HE染色后光镜下观察，可见对照组BGC823细胞呈梭形、多边形；胞核圆形呈紫

5、兰色，边界清晰，核仁可见，胞质均匀，多呈弱嗜酸性，实验组5h组823癌细胞的胞质突消失，菱形细胞减少，很多细胞周边多呈毛刺状，胞质空泡增多；胞核多呈固缩状态，着色较深，实验10h组，大部分癌细胞胞质消失，少部分癌细胞胞质水肿，HE染色时胞核固缩。2.2免疫组化结果表1阿霉素对胃癌细胞GSTπ表达的影响（灰度值）注：*与对照组和10h组比较有显著性差异（P<0.01）3讨论阿霉素是一种广谱、高效的抗肿瘤抗生素，在多种肿瘤的化学治疗中占有重要的地位。关于阿霉素的药理作用机制，目前主要有两种观点：一种观点认为ADM直接与DNA相互作用（即经典的嵌入结合）而导致对DNA复制及转录过程

6、的抑制[2]；另一种观点认为ADM可诱导氧自由基的形成，从而导致对核酸的切割[3]。近有学者采用DNA修饰的金电极表面电化学方法对AMD与DNA相互作用进行了研究[4]，结果发现，在酸性溶液中，AMD带正电荷，dsDNA带负电荷，两者之间的相互作用主要是静电结合，随着pH值的增加，在中性溶液中，AMD与dsDNA的相互作用是嵌入结合。BGC823细胞突起消失，胞质中空泡增多，可能与AMD与癌细胞中的DNA作用所致。GST是由一系列同工酶组成的一个家族,可分为5种基因家族，其中有4种在胞浆中,为α、π、μ、θ。另一种为结合在胞膜上的微粒体GST[5]。GST不仅能够催化一系列的疏水

7、亲电子化合物，如胆红素、胆酸、类固醇激素、致癌物质与谷胱甘肽（GSH）进行结合，以促进这些化合物的转变、代谢、解毒和排泄，而且GST本身还可以与亲脂性细胞毒药物结合增加其水溶性，促进其排泄，降低抗肿瘤化疗药物的细胞毒作用，保护免受细胞毒的损害[6]。GSTπ与恶性肿瘤的关系最为密切，其减弱化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用，是在肿瘤组织中通过催化方式降解药物，并且还可抑制烷化剂等化疗药物引起的癌细胞DNA交联，从而造成癌细胞耐药，其高表达对化疗耐药有重要影响[7]。在本实验