丝裂霉素对人胃癌细胞谷胱甘肽转移酶表达的影响

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1、丝裂霉素对人胃癌细胞谷胱甘肽转移酶表达的影响作者：李海峰程琳乔振江常宝　【摘要】目的：探讨丝裂霉素对胃癌细胞谷胱甘肽转移酶（GlutathioneStransferase,GSTπ）表达的影响。方法：利用人胃癌细胞株BGC823进行培养，加入丝裂霉素后5h和10h后采集细胞，进行免疫组化染色。结果：5h组，胞质中GSTπ含量下降，胞核中GSTπ增多；10h组其胞质与胞核中仍有少量GSTπ表达。结论：丝裂霉素对BGC823癌细胞有明显的杀伤作用，其途径之一可能与抑制GSTπ基因表达有关。　　【关键词】丝裂霉素；胃癌；谷胱甘肽转移酶；免疫组织化学　　【ABS

2、TRACT】Objective：TostudythekillingfunctionofmitomycinongastriccancercellsandtheexpressionofGSTπ.Methods:Ashumangastriccancercellswerecultured,mitomycinwereinjectedtoculturecontinuouslyfor5hor10h.Thegastriccancercellswereobservedunderopticalmicroscopeandtransmissionelectronmicrosco

3、peafterstainingwithimmunohistochemicalmethod.Results:Themorphologyofgastric7cancercellwasnotchangedsignificantly,butcontentofGSTπdecreasedinthe5hoursgroupinthegroup.Thechangesinthe10hoursgroupwereasfollows:thecellorganwereobviouslydestroyed,thecellmembranewereburst,theexpressiono

4、fGSTπwaslittleincytoplasmandnuclear.Conclusion:Mitomyclinhasakillingfuctiontogastriccancercells,oneofmannerswasrelatedtorestrainingtheexpressionofGSTπgene.　　【KEYWORDS】Mitomycin;Gastriccancer;GSTπ;Immunohistochemicalmethod化学治疗是对恶性肿瘤综合性治疗的一部分，丝裂霉素是临床常用的抗癌药之一，其作用效果临床已有报告，而对其作用途径，尤其是

5、它对重要酶系的影响，尚未见报告。本实验采用细胞培养技术和免疫组织化学技术，观察丝裂霉素（Mitomycin,MMC）对胃癌细胞谷胱甘肽转移酶（胎盘型，简称GSTπ）的影响，为探讨丝裂霉素的抗癌机制提供科学依据。　　1材料和方法　　11材料丝裂霉素注射液（Mitomycinfor7injection）由浙江省海正药业股份有限公司生产（批号040901）。BGC823胃癌细胞株由北京肿瘤研究所提供；二氧化碳培养箱和RPMI1640培养液由实验中心提供。兔抗人GSTπ抗血清及SP试剂盒由北京中山生物技术公司提供。　　12方法将5×104浓度的BCG823细胞接

6、种于无菌96孔板和6孔板中，培养24h。在6孔板中加入无菌盖玻片，使癌细胞附壁生长（爬片）。对照组不加入药物，实验5h组，即加入MMC15μl(00075mg),培养5h后收获，实验10h组则加药后培养10h。然后将培养液中细胞离心，25%戊二醛前固定。将附壁爬片的癌细胞培养液中分别加药5h、10h后取出盖片，用4%多聚甲醛固定，常规洗涤和SP免疫组织化学染色。其操作程序按试剂盒说明书进行。阴性对照PBS代替Ⅰ抗，阳性对照为已知人胃癌组织切片。　　13统计学处理利用彩色图象分析仪软件进行图象分析。每组随机计数100个癌细胞，以灰度表示着色深浅（深者灰度值

7、低，浅者灰度值高）。借助SPSS软件进行方差分析，然后进行独立样本t检验。　　2结果　　免疫组化染色，GSTπ7阳性物质呈棕黄色或黄色，分布在癌细胞质或少数细胞的核与质中，用药5h组胞核与胞质阳性物质均减少（见表1），其灰度升高（表示着色浅），并与对照组有显著性差异（P<001）。10h组生存细胞减少，只有生命力强代谢旺盛的部分细胞仍存活，所以这些细胞仍含GSTπ，但是与对照组相比含量减少。　　表1丝裂霉素对胃癌细胞GSTπ表达灰度的影响（略）　　注：△与对照组比较有显著性差异（P<001）　　3讨论　　丝裂霉素（Mitomycin或Muta

8、mycin,MMC）是抗癌抗生素类药物，是由轮生链霉菌培养液中提取的有效成分，其