氯化两面针碱诱导人肝癌细胞smmc7721凋亡的研究

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1、氯化两面针碱诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的研究：李丹妮，刘华钢，刘丽敏，刘林，梁霜【摘要】目的研究氯化两面针碱诱导人肝癌细胞SMMC7721凋亡的作用。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测人肝癌细胞SMMC7721生长活力；Hoechst33258核染色，观察细胞形态学变化；流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡率。结果氯化两面针碱作用于细胞后，在体外呈浓度、时间依赖性显著抑制SMMC7721细胞的生长，作用24、48、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为(19.5±1.8)、(3.8±0.2)、(2.8±0.1)mg

2、/L；Hoechst33258染色后，可见核染色质凝集，凋亡细胞呈致密浓染，与对照组相比，氯化两面针碱处理后凋亡细胞比例增加；流式细胞仪检测到G2/M细胞比例增加，G0/G1、S期细胞比例下降。药物作用于SMMC7721细胞后，随浓度增加细胞凋亡率增加。结论氯化两面针碱对SMMC7721细胞有明显的生长抑制作用，可能与改变细胞周期并诱导细胞凋亡有关。【关键词】氯化两面针碱；SMMC7721细胞；G2/M期阻滞；细胞凋亡；肝癌ABSTRACT:ObjectiveTostudytheeffectofnitidinechlor

3、ideininducingapoptosisofhumanhepatomacellSMMC772l.MethodsCellviabilityeasuredbyMTTassayinhumanhepatomacelllineSMMC7721.Morphologicalchangesofcellnucleietryedtomeasurethecellcycleandcellapoptosis.ResultsProliferationofSMMC7721cellsedependentmannersinvitro,the50%i

4、nhibitionconcentration(IC50)valueat24,48,and72hbeing(19.5±1.8),(3.8±0.2)and(2.8±0.1)mg/L,respectively.Thechromatineconcentrationandapoptoticcellsetrydetermination.AftertreatmentamechanismofSMMC7721cellsmaybeassociatede肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，恶性程度高，目前尚缺乏有效的治疗药物。细胞凋亡比例明显失调是肿瘤

5、发生发展中的重要因素，如能诱导肿瘤细胞凋亡，使其凋亡的比例增加，则可能遏制肿瘤的发生发展。氯化两面针碱(nitidinechloride)属于苯菲啶型生物碱,为黄治勋等[1]从芸香科花椒属植物两面针的干燥根提取的一种生物碱。已有的研究主要是抗炎、镇痛、解痉等，关于抗肿瘤作用机制也有相关报道，如氯化两面针碱对慢性细胞型白血病有较好的临床疗效[1]。而对肝癌的治疗还在实验研究阶段，目前国内外报道很少。本实验以肝癌细胞SMMC7721为对象，研究氯化两面针碱对肝癌细胞的生长抑制及其诱导细胞凋亡的作用，探讨其治疗肝癌的可能性。1材料

6、与方法1.1材料与仪器氯化两面针碱购自中国药品生物制品检定所(批号：110848200502，纯度>98%)；胰蛋白酶、噻唑蓝(MTT)购于AMRESCO公司；RPMI1640培养基购于美国GIBCO公司；新生牛血清购自杭州四季青生物工程公司；Hoechst33258购自江苏省碧云天生物技术研究所；AnnexinVFITC细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物科技发展有限公司；核糖核酸酶A(RNaseA)为MBI公司产品；碘化丙啶(propidiumiodide,PI)为Sigma公司产品。EpicsXLⅡ型流式细胞仪

7、为美国BeckmanCoulter公司产品，使用MuticycleAV分析软件。1.2方法1.2.1细胞培养置37℃、50mL/LCO2的培养箱中，用含100mL/L新生牛血清以及青链霉素各100u/mL的RPMI1640培养液培养，倒置显微镜观察细胞生长情况，2.5g/L胰蛋白酶消化传代，取对数生长期细胞用于实验。1.2.2MTT法检测细胞的存活率将氯化两面针碱用DMSO助溶，用基础培养基依次对半稀释成五个梯度的母液，调整各浓度中DMSO助溶剂质量浓度相同。取对数生长期细胞，以每孔0.19mL(约0.3×104个/孔)接种于

8、96孔板，培养24h待细胞贴壁后，分别加入不同质量浓度的氯化两面针碱10μL，使其终浓度分别为0.8、1.6、3.2、6.4、12.8mg/L，对照组加含等浓度DMSO的基础培养基。每个剂量组设4个复孔，其中DMSO终浓度为2.5g/L，将各组细胞继续培养24、48、72h。