阻断b7-cd28共刺激通路抑制大鼠肝移植急性排斥反应的研究

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1、阻断B7/CD28共刺激通路抑制大鼠肝移植急性排斥反应的研究作者：刘钊　纪志鹏　刘毅　徐克森【摘要】　　目的：建立大鼠原位肝移植（ROLT）急性排斥反应模型，观察细胞毒淋巴细胞抗原4免疫球蛋白（CTLA-4Ig）在大鼠肝移植术后对共刺激分子B7-1/B7-2的影响及其抗排斥反应的作用。方法：采用“二袖套管”法先行建立DA-LeRNA在两组肝脏组织中的表达情况，并同时观察其肝功能变化。结果：1）B7-1和B7-2mRNA在A组高水平表达，而在B组表达明显降低（P＜0.01）；2）B组动物术后未见明

2、显排斥反应，血清ALT、TBIL和DBIL水平明显低于对照组（P＜0.01）。结论：移植术后应用CTLA-4Ig可以降低肝组织中B7-1和B7-2的表达；动态检测B7分子的表达有助于观察肝移植排斥反应的进程。【关键词】细胞毒淋巴细胞抗原4免疫球蛋白·共刺激分子·肝移植·排斥反应　　PreventingacuterejectionafterlivertransplantationviablockadingB7/CD28costimulatorypathulatorymoleculeB7-1andB

3、7-2viathemodeloforthotopiclivertransplantation（ROLT）inrats.Methods:BuildthemodelofROLT（DA-Lely.GroupAinalcavityafter48hoursofoperation.Animalsbiochemistry（ALT,TBILandDBIL）.LivergraftseasuringtheexpressionofB7-1andB7-2mRNAbyRT-PCR.Results:１）paredRNAin

4、creasedsignificantly（P＜0.01）．２）IngroupB,noclinicalrejectioncharacterbiochemistryentcanabatetheexpressionofB7-1andB7-2mRNA.ThedynamideterminationofcostimulatorymoleculeB7ishelpfultotheobservationofrejectioncourseinrats.【KEY2200凝胶成像系统观察电泳条带存入图像。以系统的SPO

5、TDENSITY软件分别测量内参照和B7-1和B7-2基因扩增条带的密度，以B7-1和B7-2条带的密度与内参照管家基因的密度比值代表基因表达的相对水平，作扩增产物半定量分析。1.4　统计学处理　应用SPSS13.0软件进行分析，计量资料以x±s表示，两组样本均数比较采用t检验，P≤0.05为差异有统计学意义。2　结果2.1　两组动物的一般情况　A组动物于术后3～4d起开始出现体重减轻，皮肤、耳廓黄染逐渐加深，行动迟缓，尿色深黄，7d以后精神明显萎靡，消瘦，毛发蓬乱、脱落；术后7~14d内出现死

6、亡。尸检发现，肝脏脾脏肿胀严重，腹腔内腹水不明显，套管及胆道支撑管无脱落、扭曲，无腹腔内出血等手术操作失误致死因素。B组动物术后7d内亦表现为精神较差，体质量减轻，但尿色清亮，无明显皮肤、耳廓黄染；7d以后精神食欲逐渐恢复正常，体重逐渐增加。2.2　血清ALT、TBIL和DBIL测定结果　两组大鼠于术后3、5、7和10d检测血清ALT、TBIL和DBIL指标，A组肝功能损伤明显，B组肝功指标各时相点之间变化不明显，3项指标水平均明显低于A组，P<0.05（表1）。2.3　PT-PCR检测肝

7、组织B7分子mRNA的表达　B7-1mRNA和B7-2mRNA在B组低表达，而在A组明显表达，P＜0.01。各组间观察，可见B7-1mRNA和B7-2mRNA表达随时间的延长、肝移植排斥反应的进展而逐渐增强（表2，图1～3）。3　讨论　　活化的T淋巴细胞在宿主抗肿瘤、抗感染、以及自身免疫性疾病方面起着重要作用。T细胞活化的双信号学说认为，抗原特异性T细胞活化需要的两个不同信号，第一信号来自抗原特异性T细胞受体（TCR）与抗原肽-MHC（主要组织相容性复合体）分子复合物相互作用，第二信号来自APC

8、上的B7家族分子与其在T细胞上的配体CD28家族分子相结合产生的协同刺激信号［１，4］。B7-CD28是迄今为止公认的最基本的协同刺激信号，由表达在T细胞上的CD28和表达在抗原递呈细胞表面的B7-1和B7-2相互作用产生的共刺激信号［5］。所有B7分子和它们的受体都是Ⅰ型跨膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族。B7家族各成员之间有20%~35%氨基酸序列是相同的。　　CTLA-4作为识别Ｂ7家族成员的抑制性受体，和CD28同属免疫球蛋白超基因家族，具有70%的共同氨基酸序列，均为表达于T细胞表面的跨