《rnai阻断b7cd28共刺激通路在小鼠小肠移植中的抗排斥反应作用》

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1、天津医科大学硕士学位论文RNAi阻断B7/CD28共刺激通路在小鼠小肠移植中的抗排斥反应作用姓名：毕卡斯申请学位级别：硕士专业：外科学（普通外科）指导教师：刘彤;戴向晨20060520学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立迸行研究工作取得黪研究成巢。除了文中特黍鸯鬟戳标注季

2、鼹酶内容和致谢的缝方外，论文中不包含饪篱箕拖个人或集舔汪经发表或撰写过的磺究成果，与我一阉工l乍豹同态对本研究掰徽鲍任何贡献缘已在论文中捧了嚼确麴说甓并表示了落意。学缀论文作者签名：丝¨舀鲻：州年。d两。P舀毕卡斯学位

3、论文版权使用授权书本人完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，鼹：学校宥权辫学位论文酶全部域部分肉容缡入翁关数据库进行裣索，菇采麓影印、缩印或搦擒等笺黼手段保存、汇编班供套澜和借阕。阕意学校疑灏家有关部门或捉橡送交论文，并编入鸯关数据疼。作者签名：簪签名：阐期：颦冀匿天津瓣辩夭学疆圭研究擞学镀埝文审文攘簧RNAi疆断B7／CD28共刺激逶路在小鼠小肠移植中的抗排斥作用摘要本课蹶应用RNAi(RNAinterference)技术修饰骨髓源树突状细胞，通过抑制英CDS0、CD86表达鞋隧薮B7ICD28共裁激逶鼹

4、，探专薯冀对了漭巴缩慈增簸熬影晦疑极爨；研究经RNAi敲躐CD80、CD86嚣熬供傣袋源辩突凝缨腿在，l、鬣同种异体带段性小肠移植中对移植物的保护作用及机制。第一部分RNAi敲减树突状缨胞CD80、CD86表达的体外实验研究目的：探讨RNAi对DC表面抗愿CD80、CD86表达的影响及siRNA干扰DC对T淋巴维魏增毽的影响及机理。方法：采阉培养基选择法体外焙养小鼠夤髓源蛰C；i至髂熟转聚台成锌辩CDS0、CD86mRNA穿鄹特霈往siRNA，转染DC；半定量RT-PCR、流式细胞仪检测转染前臌CD80、CD86分予r

5、nRNA表达水平以及细胞褒甏抗原CD80、CD86、MHC{I、CDllc袭达情况；混合淋巴缨簸培养蕊察siRNA于莸DC翩激T漆器缨魏增殖麓力豹燮亿。绻果：每最小鼠平均W获1．5-2x107个骨髓源DC；siRNA转染DC聪，CD80、CD86分子mRNA淡这水平明盛减低，缁聪袭面抗弧CD80、CD86黼性率由85．85％，天津医科太学硕士研究生学位论文串文摘要98．31％下降至32。58％，34．69％蕊MHCII、CDllc阳性率涎明显变化；藏会淋巴缨耱培养结果显器，siRNA予抗后DCj《雩T淋巴绸稳裁激指数骥

6、嚣下降(尸<0．oi)，而加入IDO的特异性抑制剂1-MT厢，其刺激能力恢复。结论：培养基选择法可收获大爨骨髓源DC，具有典型驰形态、高袭达MHCII和熬刺激分子；掰获骨髓源DC缝激活耪始登T螽魏启动免疫应答。强SiPortTMLipid转染针对CD80、CD86mRNA的siRNA，可高效、特异地抑制CD80、CD86袭达。经RNAi敲减后DC激活异系港融细胞的能力降低。Do的活性表达对予T缨脆的增殖其有特异髓的辛牵制佟麓，阻断B7／CD28共裁激通路螽可能诱哿活性DO的产生增加。第二部分RNAi阻断BT／CD28共

7、刺激通路在小鼠小肠移植中的抗排斥佟用翻的：研究经RNAi敲减CD80、CD86麟的供体来源树突状细胞猩小鼠同耱雾镶节段经枣瑟移攘孛对移禳物懿舞厅爱痰豹孝露裁终爱及梳理。方法：采臻显微外科技术建立小鼠异位小肠移植模型。设同系对照组、异系对照缎、未干扰DC缀(受体术前7天静脉输波来经siRNA干扰的供体源DCl×106个)，siRNA干撬DC缝(爱倭寒蘩7天静瑟辕注经siRNA于挠爱瓣侯体添DCl×l萨个)。观察各组移植小肠存活时间，评定术后7天移植物排斥反应病理分级，半定量RT-PCR检测移槌物中IL-2、IFN3t、I

8、L．10及IDO分予mRNA表达水平。绩栗：siRNA于挠DC缓移疆殛嚣活霹藩(孛彼生存鬻12d)鹾显长予舅系对照组(中位生存期6d)(P．

9、植模型瓣移植物蠢保妒终用，其摅捺蓐作用机制为诱导移植物中抗原特异性T淋恐细胞无能、使Th分化方向由Th!囱Th2镶綮及诱器移毽瑟局部袭遮滔性鹾曝疆2，3双麓戴酶(Do)。蓁键清I埝,IA于扰、辩突状缨藏、共刺激遴路、吲隙黢2，3双舞瑟戴黪枣肠移植、免疫耐受、小鼠无津氍辩太学氍±研究垒学啦诧支英文攮螫Abs打actTheAnti-r