大鼠肝移植急性排斥反应相关基因的基因芯片研究

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1、中山大学博士学位论文大鼠肝移植急性排斥反应相关基因的基因芯片研究姓名：李智宇申请学位级别：博士专业：外科学指导教师：黄洁夫2003.5.1中山大学博士学位论文中文摘要一————————————————————————————————————一大鼠肝移植急性排斥反应相关基因的基因芯片研究中山大学附属第一医院器官移植外科专业：外科学博士研究生：李智宇博士生导师：黄沽夫摘要目的：了解肝移植急性排斥反应发生的主要效应细r抱--T淋巴细胞和靶器官一肝组织的基因表达谱的变化；从基因水平探讨肝移植急性排斥反应发生的细胞和分子机制，发现新的相关基因以及急性排斥反应发生过程中的新途径，从而为提高肝移

2、植术后急性排斥反应的早期诊断水平，寻找阻断急性排斥反应发生的新作用位点，为提高肝移植的疗效提供实验依据。r／方法：＼用袖套技术建立稳定的大鼠原位肝移植模型，其中实验组为封闭群Wistar(n=5)为供体，封闭群Sprague-Dawley(SD)(n=5)为受体，建立急性排斥反应模型；对照组为同品系、与排斥组受体同窝生封闭群SD(n=5)一SD(n=5)的非排斥组。在肝移植术后第五天处死大鼠，分别采取外周血和肝组织。外周血血清检测ALT、LDH；利用梯度离心和免疫磁珠方法分离、提纯T淋巴细胞，用Trizol液抽提总RNA，纯化为mRNA后，用线性扩增的方法扩增以满足芯片杂交实验需求

3、量；肝组织除一部分送病理组织学检查外，其余部分液氮速冻保存，用Trizol液抽提总RNA，纯化为mRNA后备芯片杂交实验。排斥组、对照组的mRNA逆转录为eDNA，分别用荧光素Cy5、Cy3标记后与具有4，096个大鼠eDNA文库基因片段的基因芯片进行杂交，扫描芯片杂交结果，根据排斥组和对照组Cy5、Cy3荧光强度的比值，筛选出两组间差异表达的基因，并进行相应的生物信息学分析。中山大学博士学位论文中文摘要结果：术后病理检查结果等证实了肝移植急性排斥反应模型的稳定建立；基因芯片筛选出差异表达的基因近120条，其中包括：编码急性排斥反应中与抗原识别有关的MHC—II类分子a、B、Y多肽

4、链和CD3分子6多肽链的基因：与T淋巴细胞活化的早期磷酸化事件、细胞内第二信使信号传递有关的关键酶磷酸酪氨酸激酶、多聚磷酸肌醇磷酸酯酶、蛋白激酶C相关基因；与核酸信号传导、激活、转录、翻译调控有关的基因；细胞因子表皮生长因子、转化生长因子一8、干扰素调节因子l、补体因子l、一氧化氮代谢酶等相关基因；y—GGT、LDH、细胞色素P450、黄嘌呤脱氢酶、三磷酸腺苷酶、延胡索酰乙酰乙酸酶等代谢酶类相关基因；n-l急性期蛋白抑制因子3、分泌型白细胞蛋白酶抑制物炎症期蛋白抑制物相关基因；以及与凝血、纤溶系统调节相关的编码激肽释放酶、CD36的基因等多条基因片段。1结论：。肝移植术后急性排斥反

5、应作用机制涉及多个基因，是多个基因协同作用的网络。本实验结果显示肝移植术后急性排斥反应发生时基因表达谱的概貌和所涉及的相关基因，为探索肝移植急性排斥反应发生的细胞和分子机制提供了实验依据。同时也证实了基因芯片技术的高效、稳定、可靠性。【关键词】肝移植急性排斥反应基因芯片T淋巴细胞II中山大学博士学位论文英文摘要———————————————————————————一——————————————————————————————————一ABSTRACTGenedifferentialexpressionanalysisofacuterejectioninratafterlivertr

6、ansplantationbyeDNAmicroarrayMajor：GeneralSurgeryName：LiZhiyuSupervisor：Prof．HuangJiefuObjectiveTheaimofthisstudywastoinvestigatethegeneexpressionpatternoftheTlymphocyteandliverallograftasmajoreffectivecellandtargettissue；Toexplorethecellularmadmolecularmechanismofacuterejectionafterlivertrans

7、plantationaswellastofindnovelrelatedgenesandnewpathwayoftheoccurrenceoftheacuterejection．Therefore，wecanprovideexperimentalbasistoimprovethediagnosisandcurativeeffectduringearlyperiodofacuterejectionafterlivertransplantation．Materialsan