建立近交系大鼠肝移植急性排斥模型的体会

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1、建立近交系大鼠肝移植急性排斥模型的体会【关键词】大鼠,近交系；肝移植；疾病模型,动物；移植物排斥　　Establishmentofacuterejectionmodeloforthotopiclivertransplantationininbredrats　　【Abstract】AIM:Toestablishtheorthotopiclivertransplantationmodelsininbredratsandjudgethegradesofacuterejection.METHODS:SurgicalskillsadastanifestationsandBanff

2、schema.RESULTS:FifteenmodelsofDAtoLEbosisofsuprahepaticandinfrahepaticvenacavaandobstructionofbiliarytract.Ⅰgraderejectionoccurredat3rddayandreachedthepeakat7thdayaftertransplantation.RemainingmodelsdiedofⅢgraderejectionbesidesofpostoperativeplicationodelisstableandintensive.Itcanbeeffec

3、tivelyusedtostudyallograftrejectionandtolerance.Butitisdifficulttoestablishthekindoforthotopiclivertransplantationmodelsininbredratsbecauseoftheiroodels,animal;graftrejection　　【摘要】目的：探讨近交系大鼠原位肝移植模型的建立并判断排斥反应发生的强度.方法：采用Kamada二袖套法，利用封闭群大鼠SD和L+肝素钠1支+氨苄青霉素6.0g.自制双层供肝保存容器，内、外层间置冰块.清洁级手术，在二级动物

4、实验室由双人裸眼完成.　　1.2方法　　1.2.1供体手术乙醚持续吸入麻醉，麻醉前30min肌注阿托品0.05mg.取剑突至耻骨上方腹部正中切口入腹，右侧腰静脉注入含有50U肝素的生理盐水2mL，使供体血液肝素化，逆时针方向游离肝脏.结扎并切断右肾动脉、右肾静脉，结扎右肾上腺静脉.游离胆总管下段，剪开其前壁,插入胆道内支撑管2mm，横断胆总管.游离肝固有动脉，预置线暂不结扎.结扎切断胃十二指肠动脉、胃幽门静脉,向下游离门静脉至脾静脉水平.显露腹主动脉，4号小儿头皮针穿刺其近端并固定.于左肾静脉平面处剪断肝下下腔静脉作为流出道.快速剪开膈肌，阻断胸主动脉，以低于3mL/m

5、in的速度缓慢注入4℃供肝灌洗液20mL.灌注的同时用4℃生理盐水反复浇淋肝脏表面，当肝脏变为均匀土黄色时结束灌注（图1）.取下肝脏，置于4℃供肝保存液中待用.　　图1经腹主动脉供肝双重灌注（略）　　1.2.2修肝供肝修整在4℃保存液中进行.先安装门静脉袖套，完成后，立即经门静脉低压注入2~3mL供肝灌洗液，观察套管是否通畅并排出肝脏内的残留积血（图2）.同法安装肝下下腔静脉袖套并检查通畅情况.最后修整肝上下腔静脉.更换供肝保存液，液面过肝，将供肝置于4℃冰箱中待用.供肝保存时间在1~1.5h.　　1.2.3切除受体肝脏麻醉前30min肌注阿托品0.05mg，麻醉方式、

6、开腹及暴露同供体手术.用一温热生理盐水纱布覆盖肠管并将其推向左下腹腔，游离肝脏基本同供肝操作.游离肝上下腔静脉后壁，套入一根橡皮筋备用.在右肾静脉平面以上游离肝下下腔静脉.结扎右肾上腺静脉.结扎切断肝固有动脉，保留胃十二指肠动脉.游离胆总管近端，于左右肝管汇合部向远端预插一支撑管以扩张备用，贴近肝脏剪断胆管各分支.分离门静脉左右支，分别套过一根50丝线，暂不结扎.于右肾静脉水平上方阻断肝下下腔静脉，在幽门静脉上方阻断门静脉，开始无肝期.停止乙醚吸入.以4号小儿头皮针穿刺门静脉分叉部，向肝内缓慢注入2mL常温生理盐水至肝脏变白（图3）.立即牵引肝上下腔静脉后方的橡皮筋以防

7、止血液倒流，以Satinsky钳连同部分膈肌一起阻断肝上下腔静脉.结扎门静脉左右分支，紧贴肝脏切断肝上下腔静脉、门静脉左右支、肝下下腔静脉，移除受者自身肝脏.　　图2供肝门静脉袖套安装后再灌注（略）　　图3受体门静脉阻断后自身输血（略）　　1.2.4原位肝脏移植将供肝原位置入受体右上腹，注意各肝叶勿发生扭曲.吻合过程中，肝脏表面敷以4℃的生理盐水纱布以保持供肝的低温状态.①吻合肝上下腔静脉：采用一根缝线连续缝合法，从左至右连续缝合后壁，至右侧角时最后一针扣锁缝合将缝线拉紧（图4），然后继续从右至左连续缝合前壁，至左侧角时与尾线打结.在打结