心肌细胞条件培养液对鼻咽癌细胞生长抑制作用体外实验研究

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1、心肌细胞条件培养液对鼻咽癌细胞生长抑制作用体外实验研究作者：崔艳慧　梁海军　吴敬波　任培蓉　张建文【摘要】　　［目的］探讨心肌微环境因素对高转移潜能鼻咽癌细胞的影响。［方法］原代培养新生TT法比较心肌细胞条件性上清液（CMCM）对高转移潜能鼻咽癌细胞的体外抑制作用。以顺铂作为CMCM的阳性对照，以正常细胞鼠肾小球系膜细胞作为鼻咽癌细胞的阴性对照。［结果］鼻咽癌细胞与不同浓度的CMCM共同培养后，细胞存活率明显下降（P<0.05），而对正常细胞鼠肾小球系膜细胞存活率无明显影响（P＞0.05）。［结论］新生大鼠心肌

2、细胞条件培养液可选择性地抑制鼻咽癌细胞的增殖。【关键词】心肌细胞　条件培养液　鼻咽癌细胞　uscleCellsConditionMediumonNasopharyngealCarcinomaCellsinVitroAbstract:［Purpose］Toexploretheeffectoforganicmicroenvironmentofcardiacmuscleonthenasopharyngealcarcinomacelletastasespotential.［Methods］Primarycultureofne

3、usclecellsurinecardiacmuscleconditionedmedium(CMCM)acellsbyMTTassayurinemesangialcells)asnegativecontrolfornasopharyngealcarcinomacells.［Results］Proliferationofnasopharyngealcarcinomacellsurinemesangialcellsediumofneusclecellscanselectivelyinhibittheproliferati

4、onofnasopharyngealcarcinomacells.Keyusclecell;conditionedmedium;nasopharyngealcarcinomacells;Cs由泸州医学院传染免疫室提供；酶联免疫检测仪(EXL美国)；0.25％胰蛋白酶（泸州医学院附属医院传染免疫室提供）；0.1%胶原酶（Sigma，北京华美公司提供）；MTT（北京华美公司）；底物溶液DAB试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)；ABC试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）；小鼠抗大鼠横纹肌单克隆肌动蛋白抗体MouseA

5、nti-SarericActin5C5；IgM(武汉博士德试剂有限公司)。1.2CMCM的制备选用24~72小时新生EM培养液。细胞呈对数生长期时更换新鲜DMEM培养液，继续培养24小时，收集上清液即CMCM。细胞鉴定采用小鼠抗大鼠横纹肌单克隆肌动蛋白抗体α-actin。1.3细胞培养⑴鼻咽癌细胞（E2）和肾小球系膜细胞（MCs）均用含10％的小牛血清的DMEM培养，取对数生长期的细胞进行实验。⑵培养液处理：适量的心肌细胞培养液置100℃恒温水浴锅中10min，获热灭活之培养液。适量的心肌细胞培养液中加入胰蛋白酶，终

6、浓度为0.01％，在37℃培养箱中消化30min，获得胰蛋白酶消化之心肌细胞培养液。1.4实验方法用96孔培养板培养细胞，每孔接种细胞数约为2×104。各细胞分别与CMCM原液、热灭活之培养液及其胰蛋白酶消化之心肌细胞培养液共同培养48小时后，参照Mosmann[3]的四唑盐（MTT）比色法，在酶联免疫检测仪上选择490nm波长，测定各孔的光吸收值(A值)，将顺铂（6.67μg/ml）分别与各细胞株共培养，作为CMCM的阳性对照；以DMEM为空白对照，每组实验重复3次。根据公式：细胞存活率=（试验组光吸收值/对照组光

7、吸收值）×100%，将光吸收值转换成细胞存活率。1.5统计学处理结果以x±s表示，采用统计软件SPSS11.5，进行单因素方差分析（F检验）。2结果2.1CMCM对正常非肿瘤细胞肾小球系膜细胞和肿瘤细胞E2影响化疗药物DDP对正常非肿瘤细胞肾小球系膜细胞和肿瘤细胞E2均有显著的抑制作用（P<0.01），CMCM对非肿瘤细胞肾小球系膜细胞无显著的抑制作用（P=0.763）。相反在一定程度上有促进生长作用（P<0.05）。而CMCM各稀释点对高转移性鼻咽癌细胞E2有显著的抑制作用，与DMEM相比差异具有显著性

8、（P<0.05）。2.2不同心肌细胞培养液原液对鼻咽癌存活率的影响心肌细胞培养液原液经过化学处理（胰蛋白酶消化，CMCM1）后仍保留原培养液生物活性，对鼻咽癌细胞仍有明显抑制作用，与DMEM相比差异具有显著性（P＜0.01），心肌细胞培养液原液经过物理处理（热灭活，CMCM2）后原培养液生物活性消失，对鼻咽癌细胞无明显抑制作用，与DMEM