苦参碱对体外培养的人achn肾癌细胞的生长抑制作用及其机制

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1、苦参碱对体外培养的人ACHN肾癌细胞的生长抑制作用及其机制：种铁，付德来，牛建强，李和程，张鹏，甘为民，王子明【摘要】目的观察苦参碱对体外培养的人ACHN肾癌细胞的生长抑制作用，并探讨其可能的作用机制。方法应用不同浓度的苦参碱分别作用于人肾癌ACHN细胞株24、48、72、96h，采用MTT法观察苦参碱对ACHN的细胞毒作用;透射电镜和流式细胞术检测苦参碱对ACHN细胞凋亡的影响;免疫细胞化学技术检测苦参碱对ACHN细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果不同浓度的苦参碱对ACHN细胞株均有一定的增殖抑制作用，且呈量效和时效关系;苦参碱能明显诱导ACHN细胞株凋亡;苦参碱作用后，ACHN细胞

2、株Bax蛋白表达明显增强，Bcl-2蛋白表达有下降趋势，但无统计学差异。结论苦参碱对体外培养的人肾癌ACHN细胞株有显著的增殖抑制作用，其机制可能与调节Bcl-2/Bax蛋白表达比值、诱导细胞凋亡有关。【关键词】苦参碱;肾癌;ACHN细胞株　ABSTRACT:ObjectiveToobservematrinesinhibitoryeffectonthegroanrenalcellcarcinomainvitroandexploreitspossiblemechanism.MethodsThecelllineofACHNhumanrenalcellcarcinomaatrineofdiffer

3、entconcentrationsfor24,48,72and96h,respectively.MTTassayatrineonACHNcells.TheACHNcellapoptosisinducedbymatrineissionelectronmicroscopyandfloetry.TheexpressionsofBcl-2andBaxproteinsmunocytochemicaltechnique.ResultsMatrineofdifferentconcentrationshadacytotoxiceffectonACHNcelllineinobviousdose-andtime-

4、dependentmanners.MatrinecouldobviouslyinduceapoptosisofACHNcellline.Baxproteinexpressionainvitro,ayberelatedtodootingcellapoptosis.　　KEYa)是从传统中药苦参、苦豆子中提取的生物碱(图1)，目前临床上广泛用于慢性病毒性肝炎的治疗[4-5]。近年研究发现，苦参碱对肺癌[6]、肝癌[6-7]、乳腺癌[8]、胃癌[9]等多种肿瘤的生长均表现出抑制作用。我们前期研究亦发现，苦参碱对体外培养的人肾颗粒细胞癌GRC-1[10]、透明细胞癌786-O[11]细胞株具有显著的生

5、长抑制作用。本研究拟应用不同浓度的苦参碱作用于人肾癌ACHN细胞系，进一步观察其对人肾透明细胞癌的生长抑制作用。图1苦参碱的结构Fig.1Structureofmatrine　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1细胞株人肾颗粒细胞癌ACHN细胞株购自中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，在常规37℃、50mL/LCO2及完全饱和湿度条件下培养，取对数生长期细胞进行实验。　　1.1.2主要试剂苦参碱由西安鸿生生物技术有限公司惠赠，纯度>98%;优级新生牛血清购自兰州民海生物工程有限公司(批号No.2008517);RPMI1640培养基购自美国Gibco公司(批号No.1285082

6、);膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinⅤ-fluoresceinisothiocyanate/propidiumiodide,AnnexinⅤ-FITC/PI)双标记染色试剂购自深圳晶美生物工程有限公司(批号No.20080610);Bcl-2抗体(批号No.10205)和Bax抗体(批号No.H0105)均为美国SantaCruz公司产品;链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(streptavidin-biotin-peroxidasemethod,SP)鼠二抗试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司(批号No.51182001)。　　1.1.3主要仪器POLARstarOP

7、TIMA多功能微板测试系统购自德国BMGLABTEC公司;FACSCalibur流式细胞仪购自美国BD公司;PB2032N电子微量天平购自梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司。　　1.2方法　　1.2.1MTT法测定苦参碱对ACHN细胞株增殖的影响取对数期ACHN细胞悬液100μL(5×103个)，加入96孔板(美国CorningCostar公司)，加入苦参碱，使其终质量浓度分别达到0.3、0.5、