人骨髓间充质干细胞对同种异体调节性t细胞的影响及可能机制实验研究

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1、人骨髓间充质干细胞对同种异体调节性T细胞的影响及可能机制实验研究作者：杨靖，王庆海，曾秋棠，毛晓波【摘要】本研究探讨人骨髓间充质干细胞（humanmesenchymalstemcells,hMSC）对同种异体CD4+CD25+调节T细胞的作用，进一步查明人骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞免疫调节作用的可能机制。从人骨髓中分离培养hMSC，通过免疫组织化学方法检测其表面标记并进行鉴定。从非亲缘供者健康人外周血中提取单个核细胞，在IL2作用下体外培养，实验组加入不同数量级hMSC（1×103，1×104，1×

2、105）共培养5天，对照组加入PBS。于结束培养前18小时经3HTdR标记后用β液体闪烁计数仪检测T淋巴细胞增殖，流式细胞术检测各组CD4+CD25+T细胞的百分率，RTPCR检测各组细胞Foxp3的相对表达量(Foxp3/βactin)，ELISA分别测定上清中TGFβ、IL10、IFNγ和IL12的表达。Pearson检验分析Foxp3相对表达量与CD4+CD25+T细胞百分率的相关性，以及Foxp3相对表达量、CD4+CD25+T细胞百分率与T淋巴细胞增殖程度（countspermi

3、nute,CPM值），细胞因子TGFβ、IL10、IFNγ和IL12表达量的相关性。结果表明：hMSC能明显抑制T淋巴细胞增殖，且抑制作用与hMSC呈剂量依赖性；实验组各组CD4+CD25+T细胞亚群含量以及Foxp3相对表达水平均较对照组明显增加(p<0.05)，且实验组间比较差异仍具有统计学意义(p<0.05)；Foxp3表达水平、CD4+CD25+T细胞百分率与T淋巴细胞增殖水平呈明显负相关(p<0.05)，与TGFβ、IL10表达量呈明显正相关，而与IFNγ和IL

4、12的表达无明显相关性。结论：hMSC呈剂量依赖性抑制同种异体淋巴细胞增殖,其机制可能与hMSC通过分泌TGFβ、IL10促进CD4+CD25-T细胞向表达Foxp3的CD4+CD25+调节T细胞转化，进而发挥免疫抑制作用有关。【关键词】骨髓间质干细胞EffectofHumanBoneMarroalStemCellsonAllogenEicRegulatoryTCellsandItsPossibleMechamismAbstractThestudymuneregulatoryeffectsofhu

5、manbonemarroesenchymalstemcells(hMSCs)onFoxp3expressingCD4+CD25+regulatoryTcellsandtoexplorethemechanismofimmunemodulationbyhMSCs.HumanMSCsbonemarroorphology,andthephenotypesmunohistochemistry.Humanperipheralbloodmononuclearcells(hPBMNCs)anunrelateddonor

6、inthepresenceofrhIL2.After5daysofcoculture,thepercentageofCD4+CD25+Tcellsetry.Tcellproliferationidineincorporationusingaliquidscintillationcounter.TheexpressionofFoxp3inCD4+CD25+Tcellserasechainreaction(RTPCR).Cytokines(TGFβ、IL12、IFNγ、IL10)concert

7、rationsofculturedsupernatantseasuredents,thepresenceofhMSCsanner.TheincreaseofpercentageofCD4+CD25+TcellsintheperipheralCD4+TcellphocytesRNA(Foxp3/βactin)inhMSCsgroupsRNAexpressionandthepercentageofCD4+CD25+Tcells.HoRNAexpressionandthepercentageofCD4+CD

8、25+Tcells.ItisconcludedthattheFoxp3expressingregulatoryTcellsmayplayanimportantroleintheimmuneregulatorybyhMSCs.ItsmechanismisrelatedtothatthehMSCsmediatedTGFβandIL10convertCD4+CD25-TcellsintoCD4+CD25+TregulatoryTcells,