同种异体骨髓间充质干细胞复合胶原海绵修复兔桡骨缺损的实验研究

《同种异体骨髓间充质干细胞复合胶原海绵修复兔桡骨缺损的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、同种异体骨髓间充质干细胞复合胶原海绵修复兔桡骨缺损的实验研究：杨柏林，潘勇，云雄，邹重文，曹国永【摘要】目的：了解兔骨髓间充质干细胞(BMscs)同种异体移植的存活分布情况及同种异体兔BMscs复合胶原海绵(CS)情况，观察其对兔桡骨1.5cm缺损的修复效果，为将来的进一步应用奠定实验基础。方法：采集、培养、纯化扩增新西兰大白兔BMscs，用eGFP荧光标记BMscs，与胶原海绵联合培养，植于同种异体动物臀大肌，观察存活及分布情况。建立兔桡骨缺损(1.5cm)模型，45只新西兰大白兔随机分为3组：同种异体BMscs/CS组(A组

2、)，单纯胶原海绵组(B组)，空白对照组(C组)。术后分阶段行X线、组织学检查及生物力学检查，评价其修复效果。结果：eGFP标记的BMscs异体移植存活时间超过3周。X线示12周A组大白兔5只中有4只达到骨性连接。新生骨量呈A组C组递减，至12周无一愈合。随着时间推移，A组编织骨髓腔和骨小梁增多，修复过程优于B、C组。A组生物力学指标均低于健侧正常对照组，但各指标能达到正常组的80%～90%。结论：同种异体MSCs复合CS可以修复1.5cm兔桡骨缺损。【关键词】骨髓间充质干细胞;组织工程;移植;骨缺损[ABSTRACT]Obje

3、ctive:Tostudythesurvivalanddistributionofallogenicmesenchymalstemcells(BMscs)afterimplantationintootherrabbits,evaluateosteogeiceffectivenessofcollagenspongemixedplified，theyarkedm)ofrabbitsechanicsindexedoftheanimalsinedatcertaintimeaftersurgerytoevaluateosteogeice

4、ffectiveness.Results:TheBMscsmarkedgroupAtoC.IngroupBandC,noonerabbitshealedonthe12thechanicsresultshoalcontrolgroups.Conclusion:BMscsmixedinrabbit.　　[KEYscs)是研究较多的种子细胞之一。传统的自体细胞移植在实验室研究阶段存在着大量细胞取材困难，宿主存活时间难以保证，不同宿主细胞容易混杂污染等缺点。研究发现BMscs可有效绕过机体的免疫排斥进行异体移植，基于此本文将异体BMsc

5、s复合胶原海绵，对兔1.5cm桡骨缺损修复进行了实验研究。　　1材料与方法　　1.1材料　　优质胎牛血清(杭州四季青公司);DMSO(上海生化试剂二厂);MTT(美国Sigma公司);Percoll分离液(密度1.073g/mL，天津TDB公司);DMEM/F12培养基(美国Gibco公司);胰蛋白酶(美国Amesco公司);注射用肝素钠、注射用链霉素、速眠新(华北制药股份有限公司);胶原海绵(北京益而康公司)新西兰大白兔(第三军医大学大坪医院动物中心);eGFPAd由重庆武警总队医院曹国永博士提供。　　1.2方法　　1.2.

6、1兔BMscs的分离根据参考文献[3]将幼兔肌注速眠新麻醉，无菌环境下解剖出四肢长骨，剪断两端，用10mL肝素钠(1200U/mL)湿润过的骨穿针抽取骨髓共2.5mL，至10mLDMEM/F12培养液中，抽吸、吹打使骨髓组织基本均匀分散，缓慢加入含10mLPercoll细胞分离液的离心管中，以2000rpm的转速离心20min。缓慢吸取中间的白膜状层细胞至另一离心管中，加入PBS平衡液吹洗后，以1500rpm的转速离心5min，弃去上清。洗涤，加入6mL不含血清的DMEM/F12培养液，轻轻吹吸，重悬为单细胞悬液后准备培养。　　

7、1.2.2BMscs的培养吸取2mL重悬细胞液，接种到100cm2玻璃培养瓶中，再加入5mL完全培养液，添加血清至终浓度未10%。置于37℃、5%CO2的空气、饱和湿度的培养箱内培养。24h后半量换液，72h后完全换液，以后隔日换液。待细胞长至瓶底80%面积时，以1∶3比例用0.25%的胰蛋白酶消化传代。0.25%胰蛋白酶消化生长状态良好的第三代细胞，离心，洗涤，加入冻存液中重悬，梯度降温，置于液氮中。复苏时取出细胞在空气中置5sec，水浴加热，洗涤，离心后加入完全培养基重悬。　1.2.3eGFPAd转染兔BMscs取冻存复苏

8、后的细胞，吸干培养基，以感染复数MOI=150将标记有eGFP的腺病毒eGFPAd液加入培养瓶，培养箱中孵育1h，加入完全培养基培养过夜，12h后倒掉原液，加入完全培养基培养。　　1.2.4eGFPAdBMscsCS复合材料的观察及生物相容性观察取生长状