自体骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨基质修复兔关节软骨缺损的初步研究

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1、避免使用了生物反应器。比方法‘·2”制备的支架材料具有更火的实用性。计算机辅助导航系统在前交叉韧带重建中的应用研究苏伟沙轲黄吉利程建文广西医科大学第一附属医院创伤骨科手外科目的探讨计算机导航系统在重建膝关节前交叉韧带中定位胫骨及股骨隧道的方法，评价计算机导航系统在前交叉韧带重建中的应用价值。方法使用计算机导航系统定位50例成人胫骨及股骨标本前交叉韧带胫骨及股骨隧道。在标本上观察胫骨隧道出口位置，透视后测量隧道角度，测量隧道位置。股骨隧道采用Amis法及股骨干中轴线与Bluemensatt线交叉定位法各定位30

2、例标本股骨隧道，测量股骨隧道出口位置。结果虚拟隧道角度与实际隧道测量的角度差异为1．61±1．27。。50例标本胫骨隧道关节内出口位置位于均位于胫骨内侧髁间棘与外侧髁间棘中间区域。均位于PCL撞击区与髁间窝撞击区之外。胫骨隧道平均位置为45．87±4．16％．采用Amis法定位股骨隧道关节内出口位置和采用股骨干中轴与Bluemensatt线交叉法定位股骨隧道无显著差异。结论在计算机辅助导航下可准确定位胫骨隧道，隧道位置为45．87±4．16％，隧道长度可由导航虚拟探针预测，股骨干中轴线与Bluemensatt

3、线交叉定位法是一种可行的定位方法。自体骨髓间充质干细胞复合同种异体脱钙骨基质修复兔关节软骨缺损的初步研究赵劲民韦庆军许圣荣刘军廷广西南宁双拥路6号广西医科大学第一附属医院创伤骨科手外科摘要目的：体外培养兔自体’旨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)并向软骨细胞表型分化。探讨其与兔同种异体脱钙骨基质(decalcifiedbonematrix，DBM)体外相结合培养的可行性，为下步将细胞支架复合物植入兔膝关节软骨缺损处修复关节软骨缺损做准备。方法：抽取兔股骨

4、骨髓液，分离纯化骨髓液中的间充质干细胞。取扩增传代至第3代的BMSCs分成实验组和对照组，实验组用转化生长因子-B1(transforminggrowthfactor-B1，TGF．B1)、地塞米松和抗坏血酸联合诱导，在诱导4天、7天、14天后，分别用甲苯胺蓝染色检测细胞蛋白多糖的表达，II型胶原免疫组化染色检测细胞II型胶原的表达并计算阳性率；对照组用含10％胎牛血清的LG．DMEM培养液自然分化。制备兔DBM，采用液体置换法检测经脱钙2天、3天、4天支架材料的孔隙率。扫描电镜观察DBM的超微结构，以及DB

5、M与细胞体外结合培养3天的粘附情况。结果：BMSCs易获得，体外培养生长稳定，细胞活性良好。实验组BMSCs向软骨细胞表型转化。细胞甲苯胺监染色异染，II型胶原免疫组化染色阳性率与对照组相比有显著性差异。脱钙3天的DBM多孔结构及空隙适合细胞的粘附和增殖。细胞和DBM体外培养粘附好。结论：兔自体BMSCs米源丰富．细胞活性好，经体外诱导后可以向软骨细胞表型转化。兔同种异体DBM制备方便，具有良好的特性，两者结合培养粘附好。为进一步体内实验做好准备。关节软骨是一种无血管组织，依靠关节液营养，一旦损伤，软骨自我修

6、复能力有限(11．目前临床上治疗软骨缺损常用的方法有：①软骨下穿透术；②自体骨膜和软骨膜移植术：@自体或异体软骨移植。以上修复的组织多为纤维组织或纤维软骨样结构，抗压能力低．最终导致软骨及其周围组织的退变和软骨缺损修复的失败。随着细胞生物学、分子生物学及材料科学的发展及深入研究，近年来诞生了一门新的学科——组织工程学。其核心是应用生物学和工程学的原理来发展具有生物活性的人工替代物，用以维持、恢复或提高人体组织的功能。软骨组织工程的基本方法是将自体或异体组织细胞经体外培养扩增后，接种到一种组织相容性好、并且可以

7、降解吸收的生物材科上，将细胞生物材料复合体植入体内组织缺损部位，生物材料逐渐被降解吸收，而种植的细胞继续增生繁殖，形成新的有功能的软骨组织，从而达到修复软骨缺损的目的。本实验应用兔自体BMSCs经特定培养向软骨细胞分化诱导后，复合兔同种异体DBM体外培养观察，为进一步将细胞DBM复合物植入兔膝关节软骨缺损处修复关节软骨缺损做好准备。材料与方法l、BMScs的培养及向软骨细胞的诱导健康2月龄新西兰大白兔，雌雄不拘。行BMSCs培养与鉴定．选择生《状态良好的16只兔子的第3代BMSCs加入含TGF-B110rig

8、／rid、地寒米松10JM和抗坏血酸50ug／ml的培养液进行诱导，对照组继续用10％胎牛血清的LG．DMEM液培养。每日观察细胞生长情况，每2天换液一次，于第4d、7d、14d终止诱导。甲苯胺蓝染色与H型胶原免疫组化检测诱导结果。2、同种异体DBM的制备及检测(1)取材：取5月龄健康新西兰大白兔，取四肢长骨骨端及椎体，剔除骨膜及所有软组织．(2)脱蛋白：将骨块制成0．4crux0．4crux0．5