骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养复合同种异体脱钙骨基质修复关节软骨全层缺损论文

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1、骨髓间充质干细胞和软骨细胞共培养复合同种异体脱钙骨基质修复关节软骨全层缺损论文冯万文，夏亚一，孙正义，吴萌，王翠芳，党跃修【关键词】骨髓间充质干细胞；软骨细胞；共同培养技术；脱钙骨基质；关节软骨修复Fullthicknessarticularcartilagedefectrepairmentbycocultureofautogenicbonemarroesenchymalstemcellsplantationintoallogenicdemineralizedbonematrixinrabbits【A

2、bstract】AIM:Toinvestigatethefeasibilityofarticularcartilagedefectrepairmentbycocultureofautogenicbonemarroesenchymalstemcells(BMSCs)plantationintoallogenicdemineralizedbonematrix(DBM),evaluatetheoutesofrepairmentinordertoprovideatheoreticalbasisforoptim

3、izingcellresourcesforseeding.METHODS:TentalgroupA,bysimpleDBMascontrolgroupBandbynothingascontrolgroupC.Repairedtissuesacroscopicobservation,histologicalscoresandimmunohistochemicalstainingaterichinextracellularmatrixandproliferatedpromptly.Theratioofch

4、ondrocytestoBMSCsachievedabove1∶1at5-7daftercoculture.IntheexperimentalgroupArepairedtissuesrepresentedhyaline,smoothandflat.Chondrocytesinthezonesofintegratingoremature.InthecontrolgroupBandC,repairedtissuesentalgroupAexcelledgroupBandC,andthedifferenc

5、esmunohistochemicalstainingshonnedly,richintypeⅡcollagenmatrixandintegratedsatisfactorilyentalgroupAatotetheproliferationofchondrocytesandtheproductionofchondralmatrix.Coculturedcellsforseedingcansaveanumberofchondrocytes,shortencultureperiodsandreduces

6、ubculturetimes.CoculturedcellsembeddedintoDBMcanrepairarticularcartilagedefectseffectively.【Keyarroesenchymalstemcells;chondrocytes;coculturetechniques;demineralizedbonematrix;articularcartilagerepair【摘要】目的：探讨自体骨髓间充质干细胞(BMSCs)与软骨细胞共培养复合同种异体脱钙骨基质（DBM）修复关

7、节软骨缺损的可行性，评价修复效果，为优化种子细胞源提供依据.方法：取浓度为5×109/L的第二代BMSCs和软骨细胞.freelarroesenchymalstemcells,BMSCs）含量少，随传代次数的增多，成软骨潜能明显降低，Rubio等［3］研究证实BMSCs多次传代培养有致瘤倾向.我们应用自体BMSCs和软骨细胞共培养复合同种异体脱钙骨基质（demineralizedbonematrix,DBM）修复兔膝关节软骨全层缺损，并对修复组织进行评价，为优化种子细胞源提供实验依据.1材料和方法1.

8、1材料DMEM培养基（美国Gibco公司）；胎牛血清（FBS）（杭州四季青生物公司）；CO2孵育箱（恒温培养箱，日本Sony公司）；胶原酶（美国Sigma公司）；相差显微镜（日本BH2型Olympus显微镜）；Ⅱ型胶原免疫试剂盒（武汉博士德生物公司）；青紫兰兔（卫生部兰州生物制品研究所提供）.1.2方法1.2.1BMSCs与软骨细胞共培养取本研究所实验室培养的第二代自体BMSCs，浓度为5×109/L的悬浮液1mL和相同浓度的软骨细胞悬液0.5mL（2∶