白英提取液对人肺癌a549细胞凋亡及fas-fasl基因表达的影响

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1、白英提取液对人肺癌A549细胞凋亡及Fas/FasL基因表达的影响：涂硕，韦星，赵小曼，余乐涵，万福生【摘要】　　目的　探讨白英提取液(STE)对人肺癌A549细胞凋亡及fas/fasL基因表达的影响。方法体外培养肺癌A549细胞，以0（正常对照组），10，20和40mg/mlSTE处理A549细胞48h，并以25mg/L顺铂（DDP）作为阳性对照。采用MTT法检测细胞增殖抑制率，TUNEL法检测凋亡率，半定量RT-PCR检测fas和fasLmRNA表达。结果与正常对照组比较，STE各浓度组细胞增殖抑制率显著上升（P﹤0.01），细胞凋亡率

2、明显升高（P﹤0.01），基因fasmRNA表达显著上升（P<0.05或P<0.01），而fasLmRNA表达明显下降（P<0.05或P<0.01）。结论STE通过上调fas基因和下调fasL基因表达，诱导细胞凋亡，从而抑制A549细胞增殖。【关键词】白英；A549细胞；细胞凋亡；Fas/FasL基因　　　　Abstract：ObjectiveToexploretheeffectsofSolanumlyratumThunb.Extract(STE)oninductionofapoptosisandtheexpress

3、ionoffasandfasLgenesinA549cells.MethodsLungcancerA549cellsg/Lfor48h,andthecellsg/LDDPaspositivecontrol.TheproliferationinhibitoryrateinedbyTUNELmethod.TheexpressionoffasandfasLmRNAi-quantitiveRT-PCR.Resultsparedarkedly(P<0.01).TheexpressionoffasmRNARNAarkedly(P<0.05o

4、rP<0.01)inSTEgroups.ConclusionSTEcaninduceapoptosisbyup-regulatingexpressionoffasandfasLgenes,andinhibitingthedevelopmentofA549cells.　　KeylyratumThunb.；A549cells；Apoptosis；Fas；FasL　　白英SolanumlyratumThunb.，ST为茄科植物，又称白毛藤，临床常用于鼻咽癌、肺癌、肝癌、肺癌、食道癌、胃癌等多种癌症治疗［1］。研究发现，白英提取液（STE）可

5、通过上调fas和下调fasL基因表达，诱导Hela细胞凋亡［2］。本研究通过体外细胞培养，观察STE诱导人肺癌A549细胞凋亡及其对fas/fasL基因表达的影响，探讨ST对肺癌作用的可能分子机制，为肺癌防治提供实验依据。　　1器材与方法　　1.1材料　　1.1.1细胞　　人肺癌A549细胞株由中科院上海细胞生物研究所细胞库提供。　　1.1.2试剂与仪器　　胎牛血清(FBS)、RPMI1640培养基为GIBCO公司产品，四甲基偶氮唑蓝（MTT）为上海普飞生物技术有限公司产品，原位细胞凋亡检测试剂盒为北京中杉金桥生物技术公司产品，总RNA提取

6、试剂盒为BIODEV-TECH公司产品，AccessRT-PCRsystem为Promega公司产品，PCR引物为上海生物工程公司合成。KHBK3酶标仪(芬兰),倒置显微镜(Cioc)，BX51型显微镜（OLYMPUS），PCR仪（杭州郎基）。　　1.2方法　　1.2.1STE的制备　　取ST(购买于江西南华医药有限公司中药材分公司，产地安徽)干品50g，用500ml水浸泡1h，加热煮沸后小火煎熬60min，室温冷却，120目网筛过滤，弃药渣，滤液离心(3000r/m，20min，2次)。取上清液，浓缩至50ml，调pH值为7.0～7.2，

7、0.22μm过滤除菌，获生药含量为1.0g/mlSTE，-20℃保存备用，实验时将含10%胎牛血清RPMI1640培养液稀释至所需的药物浓度。　　1.2.2细胞培养和药物处理　　人肺癌A549细胞，以含100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素、10%FBS的RPMI1640培养液，在37℃，5%CO2的培养箱中培养，细胞生长至对数增殖期，更换含0，10，20mg/ml和40mg/mlSTE新鲜培养液，用DDP（25mg/L）为阳性对照组，药物作用时间均为48h。　　1.2.3癌细胞毒性实验（MTT法）　　　　将对数生长期的肺癌A549细

8、胞移入96孔培养板中，细胞密度约1×104个/ml，每孔加入200μl细胞悬液，培养24h。弃掉孔内原培养液，加入含STE的含10%胎牛血清RPMI1640培养液200μl。每个