pparγ激活对糖基化终末产物引起的大鼠肾系膜细胞tgfβ及ctgfmrna表达的影响

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1、PPARγ激活对糖基化终末产物引起的大鼠肾系膜细胞TGFβ及CTGFmRNA表达的影响：刘辉于晓艳魏海峰石艳苗春生李才邹颖刚【摘要】目的观察过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)激活对糖基化终末产物(AGEs)引起的大鼠肾系膜细胞TGFβ及CTGFmRNA表达的影响。方法体外培养正常大鼠肾系膜细胞，逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)检测不同浓度AGEs(0～400μg/ml1)及不同浓度PPAPγ)激活剂(罗格列酮)和PPARγ阻断剂(GethodsRatmesangialcellsodifiedbovineserumalbuminornativebovin

2、eserumalbumin.NormalmesangialcellsentsRNAerasechainreaction(RTPCR).TheexpressionsofTGFβandCTGFmRNAinmesangialcellinducedbyrosiglitazone(0～10μmol/L)andtheinhibitorofPPARγ(10μmol/L)RNAexpressinginducedbyAGEs(0～400mg/L)inmesangialcells.ConclusionsPPARγactivationcanrelievetheexpressionsofTGF

3、βandCTGFmRNAinratmesangialcellsinducedbyAGEs，suggestingthatPPARγactivationhasakidneyprotectionindiabeticmellitusthroughamelioratingextracellularmatrixaccumulation.　　【Keyeproliferatoractivatedreceptorγ;Diabeticnephropathies;Glycosylationendproducts,Advanced;TGFβ;CTGF　糖尿病肾病(DN)的发病机制是以高血糖为启动因

4、素所诱导的各种血管活性物质、生长因子、细胞介质等综合作用的结果，其中转化生长因子β(TGFβ)和结缔组织生长因子(CTGF)的作用尤其受到关注。持续高血糖状态下体内蛋白质能发生一系列非酶促糖基化反应，最后形成的糖基化终末产物(AGEs)在DN发生机制中具有重要意义〔1〕，AGEs可诱导TGFβ和CTGF等基因表达异常。过氧化物酶体增殖体激活受体γ(PPARγ)是核内受体转录因子超家族成员之一，在脂肪生成、胰岛素敏感性、细胞周期调节及细胞分化中起重要作用，抗糖尿病药物胰岛素增敏剂四氢噻唑烷二酮类药物(TZDs)如罗格列酮(Rosiglitazone，RSG)是PPARγ的

5、特异性激活剂。RSG不仅能减轻糖尿病肾小球细胞外基质合成，还能增加细胞外基质的降解〔2，3〕。然而PPARγ是否影响AGEs引起的细胞TGFβ和CTGF基因表达异常目前尚不清楚。本实验通过体外培养大鼠肾系膜细胞，研究AGEs对肾小球系膜细胞TGFβ和CTGF表达的影响及PPARγ激活剂的调节作用，探讨PPARγ激活剂对DN保护作用的具体机制。　　1材料与方法　　1.1主要试剂DMEM培养基(Gibco)，小牛血清(Hycolon)，HEPEs(Sigma)，牛血清白蛋白(BSA，组分Ⅴ，Sigma)、胰酶(Amresco)、DAB(Amresco)，Trizol，Sup

6、perⅡ逆转录酶(Gibco)，DNA聚合酶(TransGene)。DNAMarker(大连宝泰克公司)，RSG(天津史克必成公司)。PPARγ阻断剂GEM。开始4d勿动培养瓶，第5天首次换液，约2RNA含量的影响将细胞消化后，计数，以1×104个/孔接种至24孔板。待细胞80%融合时用含0.5%血清的培养基同步生长24h后，加入含AGEBSA及BSA的无血清培养基，浓度分别为0、25、50、100、200、400μg/ml。48h后用Trizol收集系膜细胞，80℃冻存提取RNA。　　1.4.2不同浓度RSG对AGEs引起的TGFβ、CTGFmRNA含量的影响将细胞消化

7、后，计数，以1×104个/孔接种至24孔板。待细胞80%融合用0.5%血清的培养基同步24h后，每孔加入含100μg/mlAGEs和不同浓度RSG的无血清培养基，RSG的浓度分别为0、1.25、2.5、5和10μmol/L。48h后用Trizol收集系膜细胞，80℃冻存提取RNA。　　1.4.3PPARγ阻断剂(G：MarkerDL2000，7～12：BSA0～400μg/ml　　MarkerDL2000自上而下分别为：2000、1000、750、500、250、100bp