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1、中药复方对糖基化终末产物培养下的肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增生的影响论文.freelg/mL的中药复方提取液均能抑制AGEs培养下的鼠肾小球系膜细胞的增殖；能减少AGEs作用下的细胞上清液中羟脯氨酸含量,抑制系膜基质增生。结论中药复方能抑制AGEs引起的大鼠肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增生,提示此方可能通过阻止AGEs受体信号通路抑制糖尿病肾病的发生发展。【关键词】糖基化终末产物；系膜细胞增殖；系膜基质增生；糖尿病肾病；中药复方Abstract：ObjectiveToobservetheeffectoftheprescriptionontheprogressofmesangialce
2、llproliferationandmatrixsecretedinducedbyAGEs.MethodTheproliferationofglomerularmesangialcellculturedinmediaeasuredbyMTT.Hydroxyprolineleveleasuredbyalkalinehydrolysis.ResultTheproliferationofmesangialcellsg/mL).Theproliferationmesangiancellsandthehydroxyprolinelevelsg/mL.ConclusionTheprescription
3、couldsuppresstheproliferationofmesangialcellsandextracellularmatrixinducedbyAGEs.ItsuggestedthattheprescriptionplayasignificantroleinthepreventionofdiabeticnephropathybyinhibitingtheAGEsreceptor.Keyesangialcellproliferation；matrixsecreted；diabeticnephropathy；theprescription糖尿病肾病(diabeticnephropath
4、y,DN)是糖尿病最严重的并发症,又称“糖尿病肾小球硬化症”。肾小球系膜细胞(glomerularmesangialcells,GMC)是肾小球中最活跃的反应性细胞,.freelresco分装,怡成生物,0263；二甲基亚砜(DMSO),AR级,上海久仡化学试剂有限公司；羟脯氨酸试剂盒,南京建成生物工程研究所,20060615。1.2仪器CO2培养箱,NAPC05410,PERCISIONSCIENTIFIC；XSZ-D2倒置显微镜,重庆光学仪器厂；超净工作台,苏州百神科技网络系统有限公司,苏州市洁净技术研究所；Microplatepectrophotometer,SPECTRAmax19
5、0,美国AD公司；医用离心机,LDZ5-2,北京医用离心机厂。1.3细胞株大鼠肾小球系膜细胞株HBZY21,武汉细胞生物研究所提供。2实验方法2.1制备中药各味药按一定比例取100g,加入70%的乙醇溶液1000mL,室温提取48h,浓缩,低温干燥,得到中药总提物。2.2细胞培养取对数生长期细胞制成单细胞悬液,以100μL/孔接种于96孔板,细胞数5×104,37℃、5%CO2培养箱培养24h后,加入无血清的DMEM,于37℃、5%CO2培养箱中再孵育24h,使细胞生长同步进入休止期；弃上清液,再吸弃细胞上清液,同一水平6孔并列,加入不同浓度的AGEs以及中药提取物。将鼠肾小球系膜细胞种于
6、细胞瓶中,细胞在AGEs条件下培养3周,每3～4d传代1次。正常组：10%FBSDMEM培养基；AGEs培养组：含0.25mg/mLAGEs的10%FBSDMEM营养液培养；药物组：在AGEs培养同时分别加入药物,使中药提取液的终浓度分别为1×10-4、1×10-3、1×10-2、1×10-1、1mg/mL。2.3细胞增殖的测定3取出细胞培养板,在倒置显微镜下观察,每孔加入MTT20μL/孔,于37℃、5%CO2培养箱中孵育4h,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,加入DMSO液150μL/孔,室温下将96孔板置于微孔板振荡器上振荡10min。利用酶标仪波长490nm检测。2.4AGEs的制
7、备将质量分数为5%的无球蛋白的牛血清白蛋白(BovineSerumAlbumin,BSA)与0.5mol/LD-葡萄糖共同溶解于0.2mol/L磷酸盐缓冲溶液(pH=7.2)中,经0.22μm滤膜过滤除菌后,置37℃培养箱内孵育60d。糖基化产物孵育结束后,未结合的物质通过对磷酸缓冲盐溶液的广泛透析而除去,然后再用0.22μm滤膜过滤除菌,备用。2.5羟脯氨酸测定(碱解法)羟脯氨酸在氧化剂的作用下所产生的氧化产物与二甲氨
