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1、中药复方对糖基化终末产物培养下的肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增生的影响作者：王琼,汪宁,余黎,陈立军,朱荃【摘要】目的观察中药复方对糖基化终末产物(AGEs)培养下的肾小球系膜细胞增殖以及细胞外基质分泌的影响。方法MTT法检测肾小球系膜细胞的增殖,碱解法检测细胞上清液中羟脯氨酸的含量。结果1×10-3、1×10-2、1×10-1mg/mL的中药复方提取液均能抑制AGEs培养下的鼠肾小球系膜细胞的增殖；能减少AGEs作用下的细胞上清液中羟脯氨酸含量,抑制系膜基质增生。结论中药复方能抑制AGEs引起的大鼠肾小球系膜细胞增殖以及系膜基质增生,提示此方可能通过阻
2、止AGEs受体信号通路抑制糖尿病肾病的发生发展。【关键词】糖基化终末产物；系膜细胞增殖；系膜基质增生；糖尿病肾病；中药复方Abstract：ObjectiveToobservetheeffectoftheprescriptionontheprogressofmesangialcellproliferationandmatrixsecretedinducedbyAGEs.MethodTheproliferationofglomerularmesangialcellculturedinmediawasmeasuredbyMTT.Hydroxyprolinele
3、velwasmeasuredbyalkalinehydrolysis.ResultTheproliferationofmesangialcellswereobviously9increasedbyAGEs(0.25mg/mL).Theproliferationmesangiancellsandthehydroxyprolinelevelsweresuppressedbytheprescriptionoftheconcentration1×10-3,1×10-2,1×10-1mg/mL.ConclusionTheprescriptioncouldsuppre
4、sstheproliferationofmesangialcellsandextracellularmatrixinducedbyAGEs.ItsuggestedthattheprescriptionplayasignificantroleinthepreventionofdiabeticnephropathybyinhibitingtheAGEsreceptor.Keywords：AGEs；mesangialcellproliferation；matrixsecreted；diabeticnephropathy；theprescription糖尿病肾病(
5、diabeticnephropathy,DN)是糖尿病最严重的并发症,又称“糖尿病肾小球硬化症”。肾小球系膜细胞(glomerularmesangialcells,GMC)是肾小球中最活跃的反应性细胞,其病理变化在DN的发生和发展中居于中心地位[1]。持续高血糖状态下体内蛋白质发生非酶促糖基化反应和最后形成的糖基化终末产物(advancedglycationendproducts,AGEs)在DN发生机制中具有重要意义[2]。本实验采用体外AGEs培养的大鼠肾小球系膜细胞,观察健脾益气、补益肝肾、活血利水中药复方对其增殖以及系膜基质增生的影响,探讨延缓肾小
6、球硬化的作用机制,为中医药治疗糖尿病肾病提供依据。1一般资料1.1试剂和药物9大黄、黄芪、川芎、白术、茯苓、菊花等药材均购自南京中医药大学门诊部,经南京中医药大学王春根教授鉴定。DMEM培养基,InvitrogenCorporation；新生牛血清,杭州四季清血清厂；Thiazolyl噻唑蓝,Amresco分装,怡成生物,0263；二甲基亚砜(DMSO),AR级,上海久仡化学试剂有限公司；羟脯氨酸试剂盒,南京建成生物工程研究所,20060615。 1.2仪器CO2培养箱,NAPC05410,PERCISIONSCIENTIFIC；XSZ-D2倒置显微镜,
7、重庆光学仪器厂；超净工作台,苏州百神科技网络系统有限公司,苏州市洁净技术研究所；Microplatepectrophotometer,SPECTRAmax190,美国AD公司；医用离心机,LDZ5-2,北京医用离心机厂。 1.3细胞株大鼠肾小球系膜细胞株HBZY21,武汉细胞生物研究所提供。 2实验方法 2.1制备中药各味药按一定比例取100g,加入70%的乙醇溶液10009mL,室温提取48h,浓缩,低温干燥,得到中药总提物。 2.2细胞培养取对数生长期细胞制成单细胞悬液,以100μL/孔接种于96孔板,细胞数5×104,37℃、5%CO2培养箱
8、培养24h后,加入无血清的DMEM,于37℃、5%CO2培养箱中再
