芎嗪对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响

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1、芎嗪对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响【关键词】糖尿病肾病川芎嗪细胞增殖细胞外基质大鼠Abstract:Objective:Toexploretheeffectsoftetramethylpyrazineonproliferationofmesangialcellsandtheconcentrationofextracellularmatrixinhighglucoseculturedratmesangialcells.Methods:Ratmesangialcellsepo

2、ints,cellularsurvivalrateandproliferationentandCCK-8,Thesupernatantse-linkedimmunosorbentassay.Results:ThesurvivalratesofdifferentgroupsethylpyrazinecansignificantlyinhibitproliferationandsecretionofCollagentypeIVandFibronectininhighglucoseinducedratm

3、esangialcells.Keyethylpyrazine;cellularproliferation;extracellularmatrix;ratextracellularmatrix糖尿病肾病（diabeticnephropathy，DN）的主要病理改变是系膜细胞增殖及纤维连接蛋白（Fibronectin，FN）、Ⅳ型胶原(CollagentypeIV，ColIV)等细胞外基质（extracellularmatrix，ECM）成分增多。川芎嗪又名四甲基吡嗪(tetramethylpyraz

4、ine，TMP)，是从伞形科藁本属植物川芎根茎中提取分离的生物碱单体，具有改善微循环、血液流变学，降血糖、抗氧化、抗纤维化和拮抗钙离子等药理作用，已广泛应用于心、脑、肺、肾及血管疾病的治疗，大量临床及动物实验证明TMP对DN有很好的疗效。本研究观察了TMP对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（ratmesangialcells，MCs）增殖及FN、ColIV含量的影响，进一步探讨TMP对糖尿病肾病的保护作用及其可能机制。1材料和方法1.1材料大鼠肾小球系膜细胞株购自上海长征医院；盐酸川芎嗪粉剂购自山东长

5、富洁晶药业有限公司；正常葡萄糖（含5.5mmol/LD-葡萄糖）及高糖（含25mmol/LD-葡萄糖）DMEM培养液购自美国Gibco公司；胎牛血清（FCS）购自天津正江高科技有限公司；CCK-8试剂购自上海同仁化学研究所；FN及IV型胶原ELISA试剂盒购自美国ADL公司；酶标仪(BIO-TEKFL-800美国产品)；细胞分析仪/CASY细胞计数仪（德国CASY公司产品）。1.2方法1.2.1以CCK-8法检测细胞增殖活力：取对数生长期MCs细胞，以2000个/孔铺于96孔板，待MCs细胞贴壁后

6、，吸去原有DMEM培养液，换为1%FCS培养液,培养24h使所有细胞的生长同步化。随机分5组:①对照组（5.5mmol/LD-GluDMEM培养液）。②高糖组（25mmol/LD-GluDMEM培养液）。③TMP低剂量组（高糖培养液+200μg/mlTMP）。④TMP中剂量组（高糖培养液+500μg/mlTMP）。⑤TMP高剂量组（高糖培养液+1000μg/mlTMP）。每组设6个复孔，分别作用12h、24h、48h，于每个时间点结束前1h加入10μl/孔CCK-8，37℃、5%CO2条件下继续培

7、养1h后检测OD450。1.2.2检测细胞存活率：按上述培养、分组和作用方法，用9.9ml缓冲液，0.1ml细胞悬液于CASY细胞计数/分析仪器上直接检测细胞存活率。1.2.3检测细胞上清中ColⅣ和FN含量：双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清中ColⅣ和FN含量,按试剂盒说明书操作。每项指标每组设6孔，根据标准品的标准曲线求出相应的含量，为排除细胞数目对上清中ColⅣ和FN含量的影响，对每孔细胞数目进行校正，按每孔细胞数为1×106个来校正所得数据。1.3统计学处理方法采用SPS

8、S12.0统计软件，采用单因素方差分析，方差齐者组间比较用LSD-t检验，方差不齐者用Tamhane'sT2检验。2.3TMP对MCs分泌的FN及ColⅣ的影响与对照组比较，高糖组的12h、24h、48hFN及ColⅣ含量明显增加(P<0.05)；与高糖组相比，12h、24hTMP的高剂量组与中剂量组及48hTMP各剂量组FN及ColⅣ含量均有降低(P<0.01或P<0.05)，但不能恢复至低糖对照组水平；与对照组相比，TMP不同剂量组FN及ColⅣ含量差异无显著