灵芝对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞mmp

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1、灵芝对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞MMP【摘要】目的探讨灵芝对在高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）表达基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶-2组织抑制剂(TIMP-2)的影响。方法大鼠MCs在高糖培养下,予不同质量浓度灵芝、苯那普利刺激后,运用免疫组织化学技术和图像分析法，观察MCs表达MMP-2和TIMP-2的变化,RT-PCR检测MMP-2、TIMP-2mRNA表达水平。结果不同质量浓度的灵芝对高糖培养的大鼠MCsMMP-2和TIMP-2表达的影响不同。与高糖组相比,随着灵芝浓度逐渐增加，MMP-2的表达逐渐增加，TIMP-2的表达逐渐降低。结论灵芝通过改变高糖培养的大鼠M

2、CsMMP-2和TIMP-2的表达量,影响糖尿病肾病（DN）的进程。【关键词】灵芝;基质金属蛋白酶-2;基质金属蛋白酶-2组织抑制剂;系膜细胞;大鼠；糖尿病肾病Abstract:ObjectiveToinvestigatetheeffectofGanodermalucidumontheexpressionsofmatrixmetalloproteinase-2(MMP-2)andtissueinhibitorofmetalloproteinase-2(TIMP-2)byratglomerularmesangialcells(MCs)culturedunderhigh-glucoseenviro

3、nment.MethodsThecultureofratMCsent.Folloalucidumofvariedconcentrationsorbenazepril,thechangesintheexpressionofMMP-2andTIMP-2intheMCsandthemRNAlevelsoftheminedbyimmunohistochemicalmethod,imageanalysisandRT-PCRrespectively.ResultsThelevelsofMMP-2andTIMP-2alucidum,i.e.MMP-2increasedandTIMP-2decreasedal

4、ucidumconcentration.ConclusionGanodermalucidummaymodulatetheprocessofdiabeticnephropathybychangingtheexpressionofMMP-2andTIMP-2.Keyalucidum;matrixmetalloproteinase-2;tissueinhibitorofmatrixmetalloproteinase-2;mesangialcells;rat;diabetesnephropathy灵芝作为我国的传统的扶正固本、滋补强壮中药,用于临床已有悠久的历史。临床和药理研究表明,灵芝具有多种生理活

5、性和药理作用［1］。有证据表明灵芝(Ganodermalucidum,GL)能明显降低糖尿病（DM）大鼠的尿微量白蛋白排泄率及形态学异常,并在某种程度上抑制了TGF-β1的表达和合成,.freelesangialcells,MCs）进行干预,观察MCs表达基质金属蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2,MMP-2)及基质金属蛋白酶-2组织抑制剂(tissueinhibitorofmatrixmetalloproteinase-2,TIMP-2)的变化,旨在探讨其治疗糖尿病肾病（DN）可能的作用机制，为扩大该药的临床应用范围提供实验依据。1材料和方法1.1实验材料兔抗人M

6、MP-2、TIMP-2多克隆抗体(武汉博士德公司);SABC免疫组化染色试剂盒(武汉博士德公司);总RNA提取试剂盒、RT-PCR试剂盒（大连宝生生物工程有限公司）；大鼠MCs由上海长征医院内肾科提供；GL购自保定施达科生物工程技术有限公司,溶于加热的10%的DMEM培养基,配制不同浓度(150、300、600mg/L)的溶液,无菌过滤待用；苯那普利（benazepril,由瑞士诺华制药有限公司生产）；DMEM培养基为Gibco公司产品；胎牛血清（FBS）为杭州四季青生物工程研究所产品；二甲基亚砜（DMSO）、胰蛋白酶均为Sigma公司产品。1.2大鼠MCs的培养和分组大鼠MCs常规培养于含1

7、0%FBS的生理糖（5.0mmol/L葡萄糖）DMEM中，5%CO2,37℃条件下培养3～4天后,用0.25%胰蛋白酶消化传代。取处于对数生长期的MCs接种于培养板中,达80%融合后予无血清的DMEM培养基同步静止24h，在加或不加药物的情况下，以高糖（25mmol/L葡萄糖）培养48h.freelg/LGL组；Ⅳ组：300mg/LGL组；Ⅴ组：600mg/LGL组；Ⅵ组：10mg/L苯那普利组。