积雪草酸对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激及细胞外基质分泌的影响

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1、江苏大学硕士学位论文积雪草酸对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激及细胞外基质分泌的影响姓名：李文申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：吴晨光20120601江苏大学硕士学位论文摘要目的：观察积雪草酸(asiaticacid，AA)对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激及细胞外基质分泌的影响，探讨其对糖尿病肾病的保护作用。方法：体外培养大鼠肾小球系膜细胞，分为正常对照组mG组，葡萄糖浓度5．5retool／L)、高糖损伤组(HG组，葡萄糖浓度30retool／L)、不同浓度从干预组(HG+lnmol

2、／L从组、HG+10nmol／L从组、HG+100nmol／L从组)。分别培养1周、2周、3周后，采用荧光探针DCFH．DA进行活性氧(ROS)的检测，荧光显微镜下直接观察细胞内活性氧的水平，荧光酶标仪检测细胞荧光强度；分光光度计法检测细胞上清液中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量的变化；分光光度计法检测细胞上清液中总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—px)、过氧化氢酶(CAT)活力的变化；Westernblotting法检测细胞血红素氧合酶·I(HO-1)蛋白的表达；RT

3、-PCR检测细胞转化生长因子13I(TGF．131)mRNA的水平：ELISA法检测细胞上清液TGF．Dl以及细胞外基质成分纤连蛋fl(FN)、Ⅳ型胶原(C01．IV)水平的变化。结果：1．荧光显微镜直接观察细胞内ROS水平：用DCFH．DA标记细胞在镜下呈绿色荧光，NG组荧光很弱，HG组荧光最强，不同浓度从干预组较HG组荧光均减弱，且随AA浓度增加，荧光减弱越明显。荧光酶标仪检测细胞ROS水平：HG组较同一时间NG组明显增加(尸

4、均较同一时间HG组有明显下降(氏0．05)，且里剂量依赖性(氏O．05)，10nmol／L、100nmol／LAA干预组可恢复到正常水平。2．细胞上清液中MDA水平的变化：HG组较同一时间NG组有明显增加衅O．05)，且随时间延长而增力fl(p

5、常水平。3．细胞培养液上清中SOD、GSH．PX活力的变化：HG组较同一时间NG组有明显降低(尸

6、同一时间NG组有明显降低(．P

7、：HG组较同一时间NG组有明显增加(氏O．05)，而随时间延长无明显变化：HG+lnmol／L从和HG+10nmol／L从组较同一’时间HG组已有下降趋势，但无统计学意义；HG+100nmol／L从组较同一时间HG组有明显下降(氏0．05)，并能恢复到正常水平。7．细胞上清中TGF．B1水平的变化：HG组较同一时间NG组有明显增加(氏0．05)，而随时间延长无明显变化；HG+lnmol／LAA组和HG+10nmol／LAA组较同一时间HG组有下降趋势，但无统计学意义；HG+100nmol／LAA组

8、较同一时间HG组有明显降低(P<0．05)，并能恢复到正常水平。8．细胞上清中FN分泌量的变化：HG组较同一时问NG组有显著增加，且随时间延长而增加(尸I<0．05)；HG+lnmol／LAA组较HG组有下降趋势，但无统计学意义；HG+10nmol／L从组和HG+i00nmol／L从组均较HG组有明显下降(氏0．05)，并可恢复到正常水平。9．细胞上清中Col-IV分泌量的变化：HG组较同一时间NG组有明显增加(代0．05)，而随时间延长无明显变化；HG+10nmol／LAA组和H