益气养阴、消癥通络中药对大鼠肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响

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1、益气养阴、消癥通络中药对大鼠肾小球系膜细胞分泌细胞外基质的影响作者：张江华陈志强孙玉凤1赵雯红王月华王会青李玉梅【摘要】目的探讨益气养阴、消癥通络中药药物血清对大鼠系膜细胞细胞外基质(ECM)不同成分的抑制作用。方法以体外培养大鼠肾小球系膜细胞及血清药理学方法为基础,采用酶联免疫吸附试验检测ECM中纤维连接蛋白(FN)、层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(ColIV)的含量。结果FN、ColⅣ的含量均增加，而益气养阴、消癥通络中药对其具有明显抑制作用。结论益气养阴、消癥通络药物能够减少ECM的积聚，可能是其防治肾小球硬化的机制之一。【关键词】系膜细胞;益气养

2、阴、消癥通络;层黏连蛋白;纤维连接蛋白;Ⅳ型胶原;细胞外基质　　【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheinhibitoryeffectofherbofsupplementqiandnourishyineliminatingmassanddredgenelsandcollateralsonthemesangialcells(MCs)secretingextracellularmatrix(ECM).MethodsBasedonthemethodofculturingMCsinvitroandserumpharmacolog

3、y,thecontentsoffibronectin(FN),laminin(LN)andcollagenⅣ(ColⅣ)inECMentqiandnourishyineliminatingmassanddredgenelsandcollateralssignificantly.ConclusionsHerbofsupplementqiandnourishyineliminatingmassanddredgenelsandcollateralscandecreasetheaccumulationofECM,aybeoneofthemechanismsof

4、preventingglomerulosclerosis.　　【Keyentqiandnourishyineliminatingmassanddredgenelsandcollaterals;Laminin;Fibronectin;CollagenⅣ;Extracellularmatrix　糖尿病肾病(DN)基本病理改变为早期肾小球毛细血管球肥大，基底膜(GBM)增厚，细胞外基质(ECM)进行性积聚。ECM的产生增加和(或)降解减少被认为是ECM积聚的主要原因。系膜细胞产生ECM的能力最强。ECM的主要成分是层黏连蛋白(LN),Ⅳ胶原纤维(ColⅣ)、

5、纤维连接蛋白(FN)及蛋白多糖，因此，LN和FN、ColⅣ可作为研究DN早期病理变化的重要指征〔1〕。本研究主要针对原代培养的大鼠系膜细胞ECM进行检测，探讨消癥通络中药对DN的保护作用，为DN临床治疗提供依据。　　1材料与方法　　1.1材料益气养阴、消癥通络中药(由黄芪、积雪草、丹参、茯苓、熟地、地龙、水蛭、鳖甲、大黄、砂仁等组成，水煎、过滤、浓缩按成人剂量的15倍制成含生药0.7g/ml)，由河北医科大学附属河北省中医药中药房提供。厄贝沙坦片(安博维)，150mg/片，用时按成人用量15倍用水溶解，配制成含药浓度为1.88g/ml药液，杭州赛诺菲圣

6、德拉堡民生制药有限公司生产，批号0809155。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、胰蛋白酶、Ⅳ型胶原酶、Hepes(美国Sigma公司)，RPMI1640培养基(美国Gibco公司)，胎牛血清(澳大利亚PAA公司)，EDTA(美国Amresco公司)。318MC型酶标仪(上海三科仪器有限公司);低速离心机(北京医用离心机厂)，CO2恒温培养箱(日本三洋电机株式会社);倒置显微镜(日本Olympus公司);超净工作台(北京半导体设备厂)。　　1.2方法　　1.2.1实验血清的制备健康SD大鼠36只,SPF级,体重180～220g，雌雄兼用，由河北医科大学实验动

7、物中心提供，动物合格证编号：905042。将动物随机分为3组，正常组、中药组及厄贝沙坦组。正常组给予相应剂量的蒸馏水，其余各组按每次4ml灌胃给药，每日2次，连续3d。最后1d2次给药时间间隔为2h，于末次给药后1～2h，用3%戊巴比妥(1.5ml/kg体重)腹腔麻醉大鼠，股动脉取血，3000r/min离心10min分离血清，56℃水浴中灭活30min，0.22μm微孔滤膜过滤，-20℃冷藏备用。　　1.2.2实验分组分为①正常组：RPMII1640培养液中含5%胎牛血清+5%正常大鼠血清;②高糖组：培养液含有D葡萄糖浓度25mmol/L+5%胎牛血

8、清+5%正常大鼠血清;③高糖+AngⅡ组：培养液含有D葡萄糖浓度25mmol/L+5%胎牛血