益气养阴消癥通络中药对高糖培养足细胞裂孔膈膜蛋白的影响

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1、授予单位代码10089学号或申请号20122282HebeiMedicalUniversity硕士学位论文科学学位益气养阴消癥通络中药对高糖培养足细胞裂孔膈膜蛋白的影响研究生:方超导师:王月华教授专业:中西医结合临床内科二级学院:河北医科大学第三医院研究起止日期:2014年05月-2015年03月提交日期:2015年03月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下,由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研宄成果,其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表

2、与学位论文主要内容相关的论文,第一署名为单位河北医科大学,试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则,承担相应法律责任。研宄生签名:方足4导师签章:二级学院领导盖章:之。15年5月白河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研宂成果,除了文中特别加以标注和致谢等内容外,文中不包含其他人己经发表或撰写的研究成果,指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写,文责自负。研究生签名:导师签章:M••年》月匆日目录中文摘要………………………………………………………………………1英文摘要…

3、……………………………………………………………………3英文缩写……………………………………………………………………6研究论文益气养阴消癥通络中药对高糖培养足细胞裂孔膈膜蛋白的影响前言………………………………………………………………………7材料与方法………………………………………………………………7结果……………………………………………………………………16附图……………………………………………………………………17讨论……………………………………………………………………29结论……………………………………………………………………33参考文

4、献……………………………………………………………33综述糖尿病肾病的中医病因及治法……………………………………36致谢…………………………………………………………………………43个人简历……………………………………………………………………44中文摘要益气养阴消癥通络中药对高糖培养足细胞裂孔膈膜蛋白的影响摘要目的:糖尿病肾病(DiabeticNephropathy,DN)现已成为导致终末期肾脏病(endstagerenaldisease,ESRD)的主要原因之一,大量蛋白尿的发生是糖尿病肾组织损伤的典型标志,而足细胞损伤可导致肾小球滤过膜的

5、完整性丧失和大量蛋白漏出,因此足细胞的完整性对DN蛋白尿的产生起重要作用。前期研究中我们以益气养阴消癥通络为DN的治疗大法,已经证实该法能够通过对DN大鼠TGF-β/Smads、氧化应激及RASS系统的影响发挥对DN的治疗作用。本研究继以高糖培养足细胞为研究对象,从细胞水平观察益气养阴消癥通络法对足细胞裂孔隔膜蛋白nephrin、podocin、CD2AP表达的影响。方法:1益气养阴消癥通络中药药物血清及正常鼠血清制备健康雄性SD大鼠12只,SPF级,体重200-220g,由河北医科大学实验动物中心提供,动物合格证编号1404079。将动

6、物随机分为4组:正常组、低剂量药物血清组、中剂量血清药物组、高剂量血清药物组。正常组给予同等剂量的蒸馏水,其余三组根据Meeh-Rubner公式以低剂量组为临床半量、中剂量组为临床用量、高剂量组为两倍临床用量折算灌胃药物剂量,所用中药为中药提取颗粒,购自于河北医科大学附属医院河北省中医院中药房。各组每次灌胃剂量为2ml,灌胃给药每次间隔12小时,连续3d后末次灌胃2h后心脏取血,4500r/min离心机离心10min分离血清,56℃恒温水浴灭活30min,0.22um微孔滤膜过滤2次,-20℃冷藏备用。2小鼠足细胞培养及益气养阴消癥通络药

7、物血清对高糖培养下足细胞的nephrin、podocin、CD2AP的影响条件性永生化小鼠足细胞在33℃,γ-IFN存在的许可条件下培养传代后,在37℃,无γ-IFN的非许可条件下传代培养10-14天,促进足细胞分化成熟。分化成熟的足细胞随机分为6组:正常对照组(NormalControl,NC)、高糖对照组(HighGlucose,HG)、正常鼠血清对照组(NormalRat,NR)、低剂量药物血清组(Lowdoseofdrug,LD)、中剂量药物血清组1中文摘要(Normaldoseofdrug,ND)、高剂量药物血清组(Highdo

8、seofdrug,HD),NC组细胞给予培养基含有D-glucose5.5mmol/L+5%胎牛血清,HG组给予培养基含有D-glucose30mmol/L+5%胎牛血清,NR组给予培养基含有

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