调控smad3表达对大鼠肾系膜细胞ecm代谢的影响

《调控smad3表达对大鼠肾系膜细胞ecm代谢的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、ECMTGF-p1ColIColIVFNMsCNIMP．2TlM甲．2l之T-PCRInq吖EMT英文缩略语注释extraceIlularm枷x电唧

2、lsfominggrowthf砬t0卜pl帅eIcollagent)，peIVcoUagenfibronectinmesan百alcellsmatrixmetalloprotein笛e一2细胞外基质转化生长因子-plI型胶原lV型胶原纤连蛋白系膜细胞基质金属蛋白酶．2tisSueinhibitorofma仃{xmetalloproteinaSe·2基质金属蛋白酶组织抑制

3、因子．2reverse昀IIScfiptaSe—polyme豫：sechain旭action逆转录-聚合酶链反应ime—-eron吖T干扰素ep曲eli出．to—me∞nchymaltmnsfo哪ation上皮间质转化论文独创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示了谢意。作者签名：论文使用授权声明日期：趔箜：墨本人完全了解复旦大学有关保留、

4、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：导师签名：闩期：潮。各与徊kb·b中文摘要调控Smad3表达对大鼠肾系膜细胞ECM代谢的影响前言目前体内、外研究表明，TGF—pl／Smad信号通路在肾小球硬化发生发展中起重要作用。TGF．Bl促纤维化的作用大部分都是通过Smad3介导的，Smad3丢失后能阻止TGF．B1诱导的EMT和胶原、PAI．1、TIMP．1基因的表达，

5、Smad3敲除的小鼠对各种实验性器官纤维化模型(如放射线诱发的皮肤纤维化，博莱霉素诱导的肺纤维化，四氯化碳诱导的肝纤维化和链唑霉素诱导的I型糖尿病的肾小球硬化)都有抵抗效果；在EMT导致的纤维化改变中(如增殖性玻璃体视网膜病变，角膜损伤，单侧输尿管阻塞的动物模型)，Smad3缺失的小鼠的纤维化反应随之消失。若采用各种方法上调Smad7的表达，或者使用小分子物质hal06Jginone抑制Smad3，均能显著减轻各种器官纤维化动物模型的纤维化程度。近年来还报道IFN吖具有抗纤维化功能，在肝、肾纤维化动物模型中，均证明I

6、FN吖具有显著抑制ECM合成的作用。实验表明，IFN吖下游的Jal(／Stat和CKII／YB．1信号通路均参与这种作用，还证明与TGF．p1／Smad信号通路存在串话(cross．talk)。本课题拟采用细胞转基因及lⅢA干扰技术，观察增强或降低Smad3的表达对体外培养的大鼠肾MsCECM组分、基质金属降解酶及其抑制剂系统表达的影响；探讨Smad3在T．IFN信号转导系统影响TGF．D1的信号转导过程中的作用，为进一步阐明TGF．p1／Smad信号通路在。肾小球硬化发生中的作用，及丫．干扰素对肾小球疾病的防治提供

7、理论和实验依据。第一部分Smad3基因稳定转染对大鼠肾系膜细胞ECM代谢的影响目的通过细胞转基因技术，获得稳定过表达Smad3的MsC克隆；观察Smad3过表达对MsCColIV、FN和MMP．2／TIMP．2表达的影响；观察Smad3对FN启动子活性的影响。2中文摘要方法构建pIRES2一EGFP—Smad3真核表达质粒；采用脂质体介导法，G418筛选，将Smad3基因稳定转染体外培养的MsC，并作鉴定；分别用实时荧光定量RT．PCR、Westenlblot法，观察在TG邛1作用下，转基因MsCC01Ⅳ、FN和MM

8、P．2厂rlMP．2基因转录及蛋白表达的改变。将含FN启动子的pGL2F1900质粒转染MsC，通过测定荧光素酶活性以显示启动子的活性。结果成功构建pII迮S2．EGFP．Smad3真核表达质粒，获得稳定过表达Smad3的MsC克隆；TG邓1可显著促进其ECM合成，表现为C01Iv、FNmIⅢA分别升高2．5倍和1．3倍(氏O．05)，蛋白水平分别升高3．1倍和1．5倍(P

9、倍(P<0．05)。Smad3稳定表达的MsC细胞，F1uc相对活性是空白细胞株的2-3倍；RNA干扰抑制Smad3后，Fluc相对活性与空白细胞对照则无差异。小结构建pI]RES2-EGFP—Smad3真核表达质粒，建立稳定过表达Smad3的MsC克隆；Smad3基因稳定过表达后，TGF-B1促进MsCECM成分合成的作用明显增强，表现为Co