晚期糖基化终末产物对软骨细胞代谢活性的影响

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1、东南大学硕士学位论文晚期糖基化终末产物对软骨细胞代谢活性的影响姓名：吴春彪申请学位级别：硕士专业：临床医学指导教师：王宸2012-05-28东南人字坝．I：学位论义中文摘要晚期糖基化终末产物对软骨细胞代谢活性的影响硕士研究生：吴春彪导师：王宸教授东南大学医学院研究171的：1．掣握人胎儿及成人骨性关节炎患者软骨细胞的采集以及体外单层培养和三维培养的技术。2．比较单层培养及三维培养的区别。3．研究AGE．BSA对软骨细胞代谢的影响。研究方法：1．软骨细胞的来源：取白26周左右的引产MJ6，酒精消毒双膝关节，生理盐水冲洗后于无菌条件下切取双膝关节股骨下端及胫骨平台表面软骨，组织剪碎软骨块，采用胰蛋

2、A酶及II型胶原酶序贯消化法取得单个软骨细胞，先采用单层培养，然后进行三维培养。成人骨性关节炎患者软骨收集来自行膝关节表面置换患者，术中收集软骨快后采用相同方法获得单个软骨细胞进行培养。2．实验分组：按照实验方法分为3组：牛血清A蛋t兰t(BSA)组、AGE-BSA组、sRAGE预处理45min+AGE．BSA组。3．相关检测指标：倒置光学显微镜观察，软骨细胞II型胶原免疫组化检测，软骨细胞HE染色，甲苯胺蓝染色，RT—PCR，免疫印迹。研究结果：1．利用机械与酶序贯消化法成功获得大量软骨细胞，成功的进行了体外单层培养及三维培养，构建了相对稳定的软骨细胞体外三维培养体系。21．单层培养及三维培

3、养比较后发现，三维培养在维持软骨细胞形态方面优于单层培养。3．AGE—BSA可以促进软骨细胞内RAGE、MMP一1的信使RNA合成，抑制其II型胶原的合成分泌。结论：1．利用单层培养可快速获得大量人胎Jr／成人骨性关节炎患者软骨细胞，且体外三维培养的方法可获得较大数量表型稳定的自体关节软骨细胞。东雨入学坝Ij宇位论又2．晚期糖基化终末产物可导致软骨细胞代谢紊乱，促进软骨细胞分解代谢，抑制其合成代谢。关键词：关节；软骨细胞；细胞培养；单层培养；三维培养；晚期糖基化终术产物；晚期糖基化终术产物受体东南人学硕一J：学位论文AbstractEffeCtsofAdvancedGlycationEndPr

4、oductsonCartilageMetabolismPostgraduate：WuChun-biaoSupervisor：Prof．WangChenMedicalSchoolofSoutheastUniversityobjective：1．Tomasterthetechniqueofthecollectionofthearticularchondrocytesandthecultureofthecellsinthethreedimensionalculturesysteminvitro．2．ToIstudytheeffectsofthreedimensionalculturesystemon

5、thetendencyofgrowthandde—differentiationofthechondrocytes，inordertogainalargeamountofgoodtypechondrocytes．3．Tostudytheeffectsofadvancedglycationendproductsoncartilagemetabolism．MethodS：1．Thesourceofthechondrocytes：thechondrocytesarecomefromthejointsofkneesof26weeksfetUsunderabdominalanthesia，digeste

6、dbymachineandenzyme，andthenmakethemintocellsuspension．2．EXperimentalgroups：Experimentalgroups：inaccordancewiththeexperimentalmethodisdividedintothreegroups：bovineserumalbumin(BSA)group，AGE—BSAgroup，sRAGEpretreatment45min+ofAGE-BSAgroup．3．Evgluationofthechondrocytestheformofthecellwereobservedbymicro

7、scope，HEstain，toluidinebluestainRT—PCRandwesternblot，collagen11wasobservedimmunologically．Result：1．Thechondrocytesdigestedbymachineandenzymeweresuccessfullyculturedinmonolayerandthreedimensionalcultur