致羔羊脑炎粪肠球菌xj05luxs基因的克隆与原核表达

《致羔羊脑炎粪肠球菌xj05luxs基因的克隆与原核表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、动物医学进展，２０１４，３５（１２）：３２－３６ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ致羔羊脑炎粪肠球菌ＸＪ０５ＬｕｘＳ基因的克隆与原核表达郭秉娇，卢帅，王熙楚，郑婷婷，周霞＊，剡根强＊（石河子大学动物科技学院，新疆石河子８３２０００）摘要：采用ＰＣＲ技术从致羔羊脑炎粪肠球菌ＸＪ０５基因组中扩增得到ＬｕｘＳ基因的全序列，对其进行分析，同时与其他细菌相应基因序列及编码的氨基酸进行同源性分析；构建该基因的原核表达载体，对表达蛋白进行鉴定。结果显示，该粪肠球菌ＸＪ０５的ＬｕｘＳ基因全长４５９ｂｐ，编码１５２个氨基酸

2、，具有功能序列ＨＸＸＥＨ，核苷酸同源性与ＧｅｎＢａｎｋ上的枯草芽胞杆菌和粪肠球菌Ｖ５８３同源性最高，分别为６１．２％和１００％；构建的重组质粒经诱导后表达分子质量为２０ｋｕ的蛋白质，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测显示特异性条带。说明ＸＪ０５的ｌｕｘＳ基因与肠球菌Ｖ５８３和枯草芽胞杆菌亲缘关系较近，表达的重组蛋白具有良好的反应原性。关键词：粪肠球菌；ＬｕｘＳ基因；序列分析；原核表达中图分类号：Ｓ８５２．６１１文献标识码：Ａ文章编号：１００７－５０３８（２０１４）１２－００３２－０５［１１］群体感应（ｑｕｏ－ｓｅｎｓｉｎｇ，ＱＳ）是细

3、菌根据种群密鉴定到了粪肠球菌，但还缺乏对这些分离株是否度大小进行细胞内或细胞间信息交流、协调群体行携带和表达ＬｕｘＳ／ＡＩ－２感应系统及相关研究。因为并调控基因表达的一种方式，可通过自发释放一此，本试验以致羔羊脑炎粪肠球菌ＸＪ０５为研究对些自诱导信号分子如呋喃酰硼酸二酯（ａｕｔｏｉｎｄｕｃｅｒ－象，扩增ＬｕｘＳ基因的全长序列，与其他部分细菌相２，ＡＩ－２）来完成细菌种间的信号传导来维持细菌之应基因序列和编码蛋白质的氨基酸序列进行分析，［１－２］同时构建该基因的表达载体，初步确定表达蛋白的间微观平衡。ＬｕｘＳ基因是存在于大多数细

4、菌基因组中的一段相对保守的序列，表达的蛋白可作为免疫活性，为ＸＪ０５菌株相应基因功能的后续研究奠标志性酶合成ＡＩ－２分子，通过ＬｕｘＳ／ＡＩ－２信号系定基础。统完成细菌间的信息交流，从而改变胞内遗传物质１材料与方法的转录和翻译，调节细菌的生长代谢而导致如生物１．１材料发光、生物被膜的形成、游走、毒力因子的表达、抗生本试验所用大肠埃希菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＤＨ５α感受态、素的产生、ＤＮＡ的摄取以及细菌的生存和致病能力致羔羊脑炎粪肠球菌ＸＪ０５、ＸＪ０１、ＸＪ０８、ＸＪ１１均为［３－５］等。因此，ＬｕｘＳ基因及其表达产物在完成菌种本实

5、验室保存；屎肠球菌ＴＸ２４６６为吴利先老师馈间信息交流过程中起着关键性的作用。有研究者证赠；凝胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒、ＴａｑＤＮＡ酶实ＬｕｘＳ基因缺陷后会对变形链球菌的生长能力及购自ＴＩＡＮＧＥＮ公司；限制性内切酶ＢａｍＨＩ、［６］其蔗糖依赖性生物膜的形成产生明显影响。操ＸｈｏＩ、Ｔ４ＤＮＡｌｉｇａｓｅ购自ＴａＫａＲａ公司；其他试剂［７］敏发现猪链球菌２型（ＳＳ２）ｌｕｘＳ基因缺失株的为国产分析纯试剂。ＡＩ－２活性显著降低，严重影响了ＳＳ２对试验仔猪的１．２方法致病力。对哈氏弧菌和沙门菌ＬｕｘＳ／ＡＩ－２群体感１．２．１

6、序列结构域分析及蛋白质序列比对利用应系统信号分子的合成与降解过程的详细研究也达ＤＮＡＭａｎ软件将致羔羊脑炎粪肠球菌ＸＪ０５ＬｕｘＳ到了对病原菌防治的目的。的氨基酸序列与下列物种的ＬｕｘＳ的氨基酸序列进肠球菌在医学临床中的感染日益普遍，引起人行比对：大肠埃希菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，全长４２７ｂｐ，［８－９］们的关注。在兽医临床中关于动物感染肠球菌ＮＣＢＩ登录号ＡＪ７８６２６０．１）、沙门菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｅｎ－［１０］也时有报道。近年来，我们从新疆北疆地区部分ｔｅｒｉｃａ，全长５１６ｂｐ，ＮＣＢＩ登录号ＡＹ４９

7、６９７０．１）、溶发生神经症状和败血症为主要特征的羔羊体内分离藻弧菌（ＶｉｂｒｉｏａｌｇｉｎｏｌｙｔｉｃｕｓＬｕｘＳ，全长５１９ｂｐ，收稿日期：２０１４－０４－０４基金项目：国家自然科学基金项目（３１１６０５０７）；人力资源与社会保障部出国留学人员科研启动项目（２０１０ＬＸ００７）；大学生创新创业训练项目（２０１２１０７５９０２１）作者简介：郭秉娇（１９８３－），女，甘肃白银人，硕士研究生，主要从事动物传染病的诊断与防治。＊通讯作者郭秉娇等：致羔羊脑炎粪肠球菌ＸＪ０５ＬｕｘＳ基因的克隆与原核表达３３ＮＣＢＩ登录号ＡＹ３９１１２

8、２．１）、流感嗜血杆菌ｋｒ４９４ＢＬ２１（ＤＥ３）细胞，选取酶切鉴定正确的细菌加入（ＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅＫＲ４９４，全长５０４ｂｐ，ＩＰＴＧ诱导表达４ｈ，进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳检测，参ＮＣＢＩ登录号ＡＧＶ１０９９０．１）、肠球菌Ｖ５８３（Ｅｎｔｅｒｏ－