肌肉生长抑素对小鼠前脂肪细胞3t3-l1增殖和分化的影响博士论文

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1、北京协和医学院博士学位论文肌肉生长抑素对小鼠前脂肪细胞3T3-L1增殖和分化的影响姓名：张旭喆申请学位级别：博士专业：临床医学指导教师：史轶蘩20090601中文摘要目的：肌肉生长抑素对小鼠前脂肪细胞3T3．L1增殖和分化的影响肥胖是目前人类健康所面临的最大挑战之一，其核心病理生理过程是能量摄入与消耗之间的不平衡，导致过剩的能量以脂肪形式在体内堆积。脂肪细胞数量增多和体积增大是机体脂肪组织增加的根本途径，因而受到了研究者广泛的关注。肌肉生长抑素(myostatin，MSTN)因其对骨骼肌生长的强烈负性调节作用

2、于1997年被发现，此后又发现其与脂代谢亦存在密切关系：多项体内实验提示MSTN功能缺失具有抗脂肪形成的作用；体外细胞水平的研究则提示，MSTN抑制前脂肪细胞的分化，使其脂质累积减少，但对前脂肪细胞的增殖有无影响，对前脂肪细胞分化的可能的作用靶点是什么?目前国内外尚无相关报道。所以本研究旨在探讨MSTN对小鼠前脂肪细胞3T3．L1增殖及分化的影响，并寻找可能的作用靶点。方法：1．MSTN对小鼠前脂肪细胞3T3．L1增殖的影响：以AIMV无血清培养基培养3T3．L1细胞，使其自然增殖，于增殖第3天起以不同浓度(

3、嘣．4nM)MSTN作用于增殖中的3T3．L1细胞，之后每24小时以MTT法观察细胞增殖情况；2．MSTN对小鼠前脂肪细胞3T3．L1分化的影响：2．1．采用含胰岛素、地塞米松与IBMX的分化培养基诱导分化3T3．L1细胞，于诱导分化第8天起以不同浓度(O-．20nM)MSTN作用于分化中的3T3．L1细胞，此后每3天以油红O染色并染料提取的半定量方法及细胞内甘油三酯测定的方法了解细胞内脂质含量，从而观察MSTN对3T3．L1细胞分化的影响。32．2．313．L1细胞诱导分化8天后加入不同浓度(O及20nM)

4、MSTN，作用3天后收集细胞提取总RNA并逆转录为eDNA，采用实时荧光定量RT-PCR的方法对维持分化相关转录因子(PPARY及CEBPQ)、脂代谢关键酶(LPL、ACCl、ACSl、FAS、GPDH、DGAT、HSL、ATGL及CPTl)及脂肪因子(1eptin、adiponectin、resistin、visfatin及Ⅳ山1)mlLNA表达水平进行检测，寻找MSTN影响3T3．L1细胞分化的可能作用靶点。结果：1．MSTN对小鼠前脂肪细胞31．3．Ll增殖的影响：1．1．0．025nMMSTN抑制3T

5、3．L1细胞的增殖，持续作用至24小时该作用达到峰值(OD值为对照组89．6±8．3％，p

6、％，p<0．01；但与3．2nMMSTN组相比，两组的差异无统计学意义，矿1．00)。2．MSTN对小鼠前脂肪细胞3T3．L1分化的影响：2．1．油红O染色半定量法及甘油三脂测定法均提示MSTN对3T3．L1细胞的分化具有抑制作用，该抑制作用随MSTN持续作用时间的延长而增强。至MSTN持续作用第6天，油红O染色半定量法测定5nMMSTN组OD值为对照组59．8±11．6％，p

7、．2．3T3．Ll细胞诱导分化8天，以10nM的MSTN作用3天后，与未加药组相比，维持分化的转录因子PPAR丫及CEBPamRNA相对表达量显著降低(分别为对照组60．2±5．8％，p

8、±15．6％p=o．589及92．2±16．006p=0．449)：脂肪分解关键酶HSL及ATGLmRNA相对表达量显著降低(分为对照组75．8±7．4％及43．1±8．3％，p