流式细胞术在霉菌毒素研究中的应用

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1、·２５８·疾病防治中国畜牧兽医２０１４年第４１卷第１２期流式细胞术在霉菌毒素研究中的应用董双，何剑斌，关心，龙淼（沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳１１０８６６）摘要：世界范围内受霉菌毒素污染的农作物越来越多，这不仅造成巨大的经济损失，也给人和动物健康带来严重危害。近年来，由于流式细胞术能够对混合物中的单个细胞进行快速准确的分析，而逐步成为研究霉菌毒素细胞毒性作用的一种合理可行的方法。作者主要介绍了流式细胞术在检测霉菌毒素及其细胞毒性作用研究中的应用，以期为进一步探究霉菌毒素的毒性作用机制提供参考。关键词：流式细胞术；霉菌毒素；细胞毒性中

2、图分类号：Ｒ９９文献标识码：Ａ文章编号：１６７１－７２３６（２０１４）１２－０２５８－０５流式细胞术（ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，ＦＣ）是一项能够和油籽，作物生长、储存或随后的食品饲料加工阶段对高压驱动的样品流中单个受激光照射的生物微粒都能受到霉菌和真菌的污染（Ｆｏｒｎｅｌｌｉ等，２００４）。或细胞进行快速测量的新兴分析和分选技术，是一由于其潜在的毒性，监管机构对食品和饲料中的多种综合性的高科技检测手段（Ｐｅｒｆｅｔｔｏ等，２００４）。种霉菌毒素规定了最大含量，许多国家对霉菌毒素其特点是受激光束照射的细胞能够产生散射光信号允许限量的立法也

3、越来越严格（Ｂｒｙｄｅｎ，２０１２）。目和荧光信号，散射光信号与细胞固有属性相关，激光前关于霉菌毒素的细胞毒性作用机制尚不清楚，因束照射方向与散射光检测方向一致称为前向角散射此利用一些先进的仪器设备来检测并研究霉菌毒素（ＦＳ），反映被检微粒或细胞的近似大小；成直角的的毒性作用机制变得至关重要。作者主要就流式细散射方向称为侧向散射（ＳＣ），其与细胞内部复杂的胞术在黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）、脱氧雪腐镰刀菌烯颗粒度有关，而荧光信号反映的是如抗原分子表达醇（ＤＯＮ）、玉米赤霉烯酮（ＺＥＮ）、交链孢酚情况的化学属性（Ａｌｖａｒｅｚ－Ｂａｒｒｉｅｎ

4、ｔｏｓ等，２０００）。流（ＡＯＨ）、伏马菌素Ｂ（ＦＢ）、橘霉素（ＣＩＴ）和赭曲霉１１式细胞术的优势包括能够逐一分析大量细胞、具有毒素Ａ（ＯＴＡ）这些常见霉菌毒素研究中的应用情高灵敏度和精确度，采用多种荧光染料或荧光素偶况进行概述。联抗体可同时检测单一细胞表面或内部的多种物理１流式细胞术在霉菌毒素研究中的优势化学特征（Ｔｅｌｆｏｒｄ等，２０１２；Ｋｒｕｔｚｉｋ等，２００４），不仅１．１检测与分析细胞周期流式细胞术在霉菌毒可改善健康和疾病中复杂细胞功能的研究，还可提素细胞毒性研究中的应用主要是检测细胞周期和细高识别和分离所检测细胞亚群的能力。

5、霉菌毒素是胞调亡。通过光学显微镜观察，可看到细胞周期中由霉菌和真菌产生的次生代谢产物，其可能污染食细胞形态一系列的变化，但是该方法所需时间较长，物链的所有阶段。霉菌毒素的感染对人和动物的健且步骤繁多。应用流式细胞术能够准确、直接地检康极具威胁性，毒理学综合征表现为从急性死亡到测各个细胞周期ＤＮＡ含量的变化（Ｈｉｒｔ，２０１３），相生长缓慢，繁殖力下降，且免疫力减弱，因而降低了对于放射自显影技术并不会使核酸变性（Ｋｏｔｏｇáｎｙ机体对疾病的抵抗力。存在于环境中的霉菌毒素会等，２０１０），从而计算出不同细胞时期的分布比例，进影响人和动物所消耗

6、的食物或农作物，特别是谷物而了解霉菌毒素对细胞的细胞周期、细胞增殖和分裂能力的影响。收稿日期：２０１４－０５－１３１．２检测与分析细胞凋亡通过形态学观察是无作者简介：董双（１９８９－），女，辽宁人，硕士生，研究方向：临床兽法区分细胞凋亡和细胞死亡的，而且细胞凋亡过程医学。通信作者：何剑斌（１９６９－），男，贵州人，硕士生导师，教授，研究发展迅速，不是一般的形态学观察就能判断的。不方向：临床兽医学。Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｅｊｉａｎｂｉｎ６９＠１６３．ｃｏｍ同于电子显微镜、荧光显微镜和光学显微镜对凋亡龙淼（１９７８－），男，吉林人，博士，讲师，研究

7、方向：动细胞的形态学观察，以及利用电泳技术检测到的物营养代谢病及中毒病。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｏｎｇｊｌａｕ＠１２６．ｃｏｍ基金项目：中国博士后科研基金项目（２０１４Ｍ５５１１２５）；国家自然ＤＮＡ片段化“云梯状”电泳图谱（郭延锋等，２０１０），科学基金项目（３１２０１９６１、３１３０２１５２）。应用流式细胞术检测细胞凋亡，不仅可以进行定性，中国畜牧兽医２０１４年第４１卷第１２期疾病防治·２５９·也可进行定量，同时能够从多个判定标准（如细胞成多聚体，发射红色荧光，经流式细胞仪检测获得的ＤＮＡ含量变化、线粒体膜电位下降、胞内活性氧增这种特异性的表

8、现使结果更加准确可信，敏感性更加等）来证实细胞调亡（ＶａｎｄｅｎＢｅｒｇｈｅ等，２０１３），好（Ｃｈａｎｇ等，２０１０；Ｐｅｒｅｌｍａｎ等，２０１２）。进而与细胞坏死区分，在检测的同时可进行分