流式细胞术在肿瘤学中的应用

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1、流式细胞术在肿瘤学中的应用内容流式细胞仪概念、原理及应用流式细胞术优势流式细胞术在肿瘤学中的应用流式细胞术（FlowCytometry）是利用流式细胞仪检测细胞或其它颗粒性物质的物理、化学特性。同时利用荧光染料,激光技术,单抗技术以及计算机技术的发展,大大提高了检测速度与统计精确性,而且从同一个细胞中可以同时测得多种参数,为生物医学与临床检验学发展提供了一个全新的视角和强有力的手段。流式细胞术流式细胞仪检测流程流式细胞术优势（分析型）高速测定细胞，大样本计数检测稀有细胞多参数分析FC500流式细胞仪流式细胞术的应用检测特性：

2、大小、颗粒度、细胞受体/分子、核酸(DNA/RNA)、蛋白……肿瘤学中的应用肿瘤免疫肿瘤细胞周期和凋亡肿瘤干细胞的研究血液中循环肿瘤细胞的研究肿瘤免疫学天然免疫中性粒细胞嗜酸性细胞嗜碱性细胞单核细胞/巨噬细胞树突细胞:mDC-pDCNK细胞NKT细胞T淋巴细胞CD5+B细胞获得性免疫B细胞辅助性T细胞Th1Th2细胞毒T细胞调节性T细胞淋巴细胞免疫分型T细胞：CD3+CD4+(Th，Treg)CD8+(Tc)B细胞：CD19+NK细胞：CD3-CD56+肿瘤细胞免疫特点CD3CD4CD8CD4/CD8NKCIK正常正常正

3、常正常正常正常正常正常正常正常正常Th1Th2细胞因子分泌细胞测定Th1细胞：介导细胞免疫、细胞毒性T细胞的生长和活化、巨噬细胞的活化、介导迟发型过敏反应。其功能亢进将导致炎症慢性迁延，器官特异性自身免疫病，急性排异反应和接触性皮炎等的发病和免疫病理损伤。Th2细胞：介导体液免疫，促进B细胞的生长、活化和分化，是IgG1和IgE类抗体的转换因子，其功能亢进将导致特异性过敏反应，参与高IgE综合症和嗜酸性粒细胞增多症。Th1/Th2漂移与肿瘤免疫肿瘤可使Th1/Th2平衡向Th2偏移,而Th1/Th2偏移又会促进肿瘤的发展,故

4、探讨Th1/Th2功能状况以判断肿瘤患者的免疫状态可为肿瘤生物治疗提供有效的理论依据。CD4+CD25+调节性T细胞调节性T细胞具有免疫抑制功能，在多种免疫性疾病中起重要的调节作用，成为近年来免疫学领域研究的重要内容。许多研究表明：在实体肿瘤和血液恶性肿瘤患者中Treg数目增多。在乳腺癌、卵巢癌、肺癌以及肝癌等多种实体肿瘤患者外周血和肿瘤局部微环境中,Treg比例增高,且数目与患者肿瘤进展程度和预后、生存率呈负相关。血液恶性肿瘤患者中Treg数目呈肿瘤发展阶段相关性增长。但是,Treg增高的机制尚不清楚。去除Treg或封闭其

5、抑制功能，可以增强抗肿瘤免疫反应。化疗作为一种重要的治疗肿瘤的方法,对肿瘤患者外周血中的Treg数目可产生一定影响。化疗药物可能通过抑制肿瘤微环境中血管生成,促进Treg凋亡,从而起到有效控制肿瘤的作用。但也有报道证明肿瘤患者接受化疗后,外周血中Treg数目增多。化疗究竟对Treg会产生怎样的影响,目前尚无定论,有待于进一步研究。因此,Treg在肿瘤治疗方面的应用成为研究的热点。如何清除或逆转Treg的抑制作用是肿瘤免疫治疗的一个关键问题。树突状细胞(DC)DC控制体内免疫和耐受的平衡控制T,B细胞对可溶性抗原的反应影响产生

6、免疫球蛋白的分类DC亚群分为MDC和PDCMDC诱导免疫应答PDC诱导免疫耐受树突状细胞流式分析阴性表达抗原设门Lin(CD3,14,19,20,56)/HLADR组合DC:Lin-/HLADR+DC亚群分析骨髓DC:CD11c+外周血DC:CD123+(IL3Ra)阳性表达抗原设门CD85k(ILT3)阳性设门仅在单核巨噬细胞及DC细胞表达比HLADR表达更具特异性避免阴性设门DifferentiationofDCsubsets:外周血DC:CD123+(IL3Ra)骨髓DC:CD33+ILT3-PEILT3-PECD14

7、+CD16-FITCCD33-PC5CD33-PC51234骨髓DC:CD14CD16/CD85K（ILT3）/CD33ILT3-PEILT3-PECD14+CD16-FITCCD123-PC5CD123-PC5外周血DC:CD14CD16/CD85K（ILT3）/CD123生物免疫治疗CIK细胞(cytokine-inducedkiller)是一群以CD3+T细胞为主的异质性细胞群体，包括CD3+CD56-、CD3-CD56+及CD3+CD56+三种亚群,主要效应细胞为CD3+CD56+细胞。CIK细胞来源于外周血中的CD

8、4-CD8+及CD4-CD8-T细胞。因其同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，故兼有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞非MHC限制性杀瘤特点，是目前所知杀伤活性最强的一种免疫效应细胞。CIK细胞治疗过程的评价治疗前病人免疫状况评价T亚群、NK、CIK、细胞因子是否适合做、能否能培养、值