流式细胞术在血液学中的应用

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1、髓过氧化物酶（MPO）是一种血红蛋白，它由两条53kDaffi链和两条15kDa轻链组成，英分子量为140kD。每一个MPO分子包含两个起催化作用的非月元基吓咻。MPO储藏于中性粒细胞的嗜天青颗粒中。MPO是中性粒细胞杀菌系统中的主要成分，它能催化氯离子（Cl・）和过氧化氢（H2O2）生成强氧化剂次氯酸（HOCI）。在许多炎症反应中，MPO被释放到细胞外,作为反映中性粒细胞活性的一个指标。激活的口细胞分泌MPO,其产生的过氧化物在宿主防御中起重要作用。MPO与动脉粥样硬化等心血管疾病密切相关，MPO影响粥样斑块稳定性及血栓形成，MPO促进氧

2、化脂类（具细胞毒及促凝血作用）产生，同时耗竭NO引起血管收缩。激活白细胞释放的MPO,在敏感的斑块中高表达并且具有催化活性，被认为是影响斑块的稳定性的一个重要因素。MPO可作为预测急性冠脉综合症（ACS）指标。血浆MPO水平可以在不考虑C反应蛋白及英它的炎症标志物的情况下独立预测心血管疾病的危险性，血浆MPO水平可以预测急性局部胸痛病人6个月内患心肌梗塞及其他严重心血管疾病的危险性。更重要的是，对于肌钙蛋白I（TroponinI）及肌钙黃白T（TroponinT）等经典检测排除心梗的患者，检测MPO水平可以预测这些病人发生心梗等严東心血管疾

3、病的危险性。单一的血浆MPO检测能独立预测早期心肌梗塞的危险性，及在随后的1至6个月内发生严重心血管疾病的危险性。与检测TroponinkTroponinT、CK-MB.C反应蛋白水平不同，MPO检测可预测无心肌坏死的患者发生严重心血管事件的危险性，突出了它在预测胸痛病人出现心梗危险性的潜在作用。一、流式细胞术在基础血液学中的应用（一）血细胞的计数和分类研究1.红细胞的计数、分类及其功能的研究（1）循环的红细胞总量的测定：生物素一逆转抗生物素蛋白一FITC系统的特异性和流式细胞仪（FCM）的敏感性结合起来，建立了FCM测定人红细胞总量的方法

4、，此方法具有标本用量少，无放射性的优点,适用于儿童和孕妇测定循环红细胞总量。（2）网织红细胞总数：外周血网织红细胞计数（百分数和绝对值）是一反映骨髓红系增生活性的常用指标。许多学者先后提出应用FCM和不同的RNA特异性荧光染料自动计数网织红细胞的方法，如派若宁Y、A0＞澳化乙噪、thiazoleorange等。目前最普遍应用的是thiazoieorange染色法，这种特异性RNA的激发波（488nm）测量的特点，与人工计数法相比，它不但能得到网织红细胞的百分数和绝对值，而且还能获得网织红细胞成熟指数（RMT）oRMT是一个检测骨髓功能的独立

5、实验室指标，它与网织红细胞内RTA含量成正比，RMT可成功地用于评价骨髓移植的效果。目前，FCM检测网织红细胞主要用于1）预测骨髄移植的效果；2）解释各种红系增长低下性贫血的发病原因；3）评价某些新的重组生物制剂的治疗效果。1.白细胞计数、分类及其功能的研究（1）白细胞计数和分类FCM方法避免常规染色过程中，由于细胞漂洗和分类溶解所致的人工假彖，提供了可靠的评价血液状态的第一手资料，并进一步筛选细胞亚群、测定其他参数。LDS-751.CD45.thiazoleorange（2）中性粒细胞的功能FCM可在单个细胞水平上定量测定中性粒细胞的功能

6、变化，有助于了解白细胞在感染性疾病、白身免疫性疾病、恶性疾病的作用和诊断意义。（3）血小板功能的研究：FCM可检测血小板膜抗原,如CD41a、CD42b、CD36、CD62p、CD63等。应用流式细胞术检测这些单克隆抗体的变化可用于：a、评价血小板功能状态；b、探测循环血液屮激活的血小板；c、探测血小板自身抗体。如对原发性血小板减少性紫瘢、慢粒急变和再障病人的血小板自身抗体的检测中发现，病人均可探测到IgM型自身抗体，有的病人可同吋伴有IgM或IgA自身抗体，后者血小板减少更明显。因此，IgG血小板免疫荧光检查是检测自身免疫反应的敏感和特异

7、指标，它可直接测定自身免疫性血小板减少病人的血小板表面免疫球蛋白，进行血小板交义配型，以此为有口身免疫反应的病人选择合适的供血者。（二）正常骨髓各系血细胞特点的研究1.造血干细胞的特点：FCM多参数分析可以探测常规形态检杳方法不能确认的造血干细胞。1.红细胞系统的特点：FCM系统地观察了红系统表面特异性抗原（Hie-1、CD71和GlycophorinA）核酸及红细胞体积的变化來研究红系在正常骨髓分化成熟的规律。GlycophorinA常作为红细胞晚期的特征，出现在有核红细胞，此吋可与体积相似的淋巴细胞进行鉴别，GlycophorinA在成

8、熟红细胞达到最大值，不再随红细胞的成熟而变化。CD71表达介于HleT和GlycophorinA之间，在GlycophorinA出现之前，达到最大值。Hle-1主要表达在最早期对