流式细胞术在临床中的应用.ppt

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1、流式细胞术在临床中的应用马雷流式细胞术20世纪60年代末发展起来的细胞定性和定量的技术。通过收集激光照射到细胞后的散射光信号和荧光信号反映细胞的物理化学特征，并且根据细胞的物理化学特征分选得到感兴趣的细胞。流式细胞仪构造模式图液流系统光学系统电子系统分选系统细胞与分子生物学、流体力学、电磁理论和生物技术、激光技术、荧光技术、光电子技术、单克隆抗体技术、计算机技术、纳米技术等。流式细胞术是现代科学技术发展的综合交叉的产物，是集多种技术发展于一体的“大成者”。涉及多种学科及技术流式在肿瘤学中的应用1、JY细胞周期与DNA倍体分析标本类型：胸水和腹水血液标本组织块标本原理细胞

2、周期G2MG0G1s02004006008001000G0G1sG2MDNA分析细胞数量2N4N临床意义：肿瘤的早期诊断与鉴别良恶性胸腔积液和腹水的鉴别诊断用于临床肿瘤治疗效果监测用于临床抗肿瘤治疗时药物的选择用于早期淋巴瘤的诊断用于良性肿瘤与中低度恶性肿瘤的鉴别用于肿瘤患者的预后判断流式在肿瘤学中的应用2、JY细胞凋亡分析标本类型：胸水和腹水血液标本组织块标本原理PI-FluorescenceEvents调亡细胞正常G0/G1期细胞临床意义：用于临床抗肿瘤疗效监测早期凋亡细胞百分数是临床抗肿瘤治疗有效的较早期评价指标流式在肿瘤学中的应用3、JY肿瘤多药耐药基因CD24

3、3检测标本类型：胸腔积液腹水组织标本贴壁培养细胞原理：化疗药物对肿瘤细胞的杀伤作用，依赖于进入细胞内部的药物浓度的高低。多药耐药基因-1是一种糖蛋白，编号为CD243。这种糖蛋白可以大量捕获进入细胞内部的化疗药物，并将其“搬出”细胞。使细胞内部化疗药物浓度降低，造成药物对瘤细胞的杀伤作用降低或消失，最终出现耐药性现象。临床意义：了解瘤细胞CD243表达水平，如果是高表达，提示化疗疗效可能很差，宜采取放疗。如果瘤细胞CD243表达水平很低或不能检出，化疗过程中建议定期监测瘤细胞CD243水平。辅助判断预后。流式在免疫学中的应用4、JY淋巴细胞亚群标本类型：静脉血临床意义可

4、将淋巴细胞分类为临床意义B细胞减少见于原发及继发性免疫功能低下、严重的病毒感染等情况。B细胞增高，提示机体体液免疫功能被增强，见于临床各种细菌性感染。及B细胞白血病。NK细胞数量是肿瘤临床病情判断、疗效监测的指标。NK细胞减少见于脑心肌炎病毒、流感病毒、EB病毒、柯萨奇病毒等。流式在免疫学中的应用5、JY总T、T4、T8淋巴细胞标本类型：静脉血临床意义T4增高，主要见于临床各种细菌性感染性疾病。T4降低，主要见于临床各种病毒感染性疾病。有助于艾滋病的诊断、疾病分期判断和疗效监测。正常人HIV感染者AIDS病人T8增高，多见于HBV、巨细胞病毒（CMV）、人类疱疹病毒（E

5、B）及结核杆菌感染。CD8+CD38+亚群是疾病进展和病毒复制的预测指标。T8减低，多见于r免疫球蛋白缺乏症、胸腺发育不良和糖尿病等。AIDS病人HIV感染者正常人流式在免疫学中的应用6、JY辅助性T细胞（Th）和诱导性T细胞（Ti）检测临床意义：Th细胞（CD4+CD29+）减少见于免疫缺陷、严重感染、肿瘤患者，可作为肿瘤诊断及疗效监测的指标。增多见于各种感染。Ti细胞（CD4+CD29-）具有诱发免疫应答的功能。流式在免疫学中的应用7、JY效应T细胞（Th1、Th2）检测8、JY调节性T细胞检测9、JY辅助性T细胞17(Th17)检测发育分化趋化因子受体产生所需细胞

6、因子和转录因子表达细胞因子正常免疫功能异常时发生疾病抗胞内病原体过高引起器官特(病毒、细菌)免疫异性自身免疫病初始T细胞IL-12IFN-IL-4TGF-IL-2TGF-IL-6IL-23IL-6IL-21抗原刺激后T细胞CCR7CXCR5Th1Th2TregTh17TfhIFN-IL-2LTCXCR3CCR5IL-4,5,10IL-13,25TGF-IL-35IL-10IL-17IL-21IL-22CCR4,6IL-21IL-10CXCR5免疫负调节过高或过低与肿瘤和免疫耐受或自身免疫病相关抗胞外病原体过高引起过敏性(寄生虫)免疫炎症和哮喘抗胞外细菌和过高

7、引起炎症性真菌免疫和炎症疾病(EAE、CIA等)辅助B细胞过高引起抗体相关产生抗体自身免疫病过低引起免疫缺陷CrTh2根据KingC(AnnuRevImmunol2008)修改Bcl-6STAT-3RORtFoxp3GATA-3STAT-6T-betCD4+T细胞亚群的分化与细胞因子的关系TH1/TH2自身免疫病参与拮抗Th1亢进Th2亢进恶性肿瘤（非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞癌、绒膜癌、脑胶质瘤、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、黑色素瘤、结直肠癌、淋巴瘤等）√良性肿瘤√感染寄生虫病（利什曼病、蠕虫病、丝虫病和血吸虫病等）√真菌√病毒感染-丙肝√病