流式细胞术在肿瘤临床和研究中的应用.doc

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1、流式细胞术在肿瘤临床和研究中的应用周永列1.3免疫分型中的几个问题1.3.1单克隆抗体的选择白血病免疫分型时尽量选用系列特弄性强的单抗作为一线单抗，冃前较为公认系列特界性单抗有T系的cyCD3,B系的cyCD79a>cyCI)22和髓系的MPO、cyCD13等。一般说胞浆比胞膜的标志特异性强。用此特异性强的标志作为初筛，基本可确定T、B或髓系，然示再进一步分析。以下为各系列较特别的标志：AML：MP()、CD33、CD13、CD14CD15、CD11IkCD1.1CT-ALL：c/mCD3、CD2、CD5、CD7、CD4/CD8.CD38B-ALL：cCD22、cCD7

2、9、CD19、CD10、CD24、HLA-DR、CD20、CD38造血干/祖细胞——D34、CD117、CD38、HLA-DR、AC133AML各亚型的免疫分型中有时仍较难分辨，有以下特点可供参考：%1CD41、CD61是巨核细胞的标志，见于FAB-M7,但血小板粘附于某细胞上可造成假阳性。%1CD71与血型糖蛋白是红系的标志，见于FAB-M6型。%1CD14、CD64是单核细胞的标志，见于M4或M5。%1FAB-M3,t仃5；17)者典型的免疫表型是CD13+、CD33+、CD9+、CD38+、CD34-、DR-。%1t(8；21)M2的表型为CD13+、DR+、CD

3、34+、CD33+、CD15+、CD19+或CD56+。%110与Ml较难区分，应有髓系标志而无淋系标志，胞浆MPO应阴性。CD34及DR在M0较强,并可伴有CD7与CD4。%1CD117+多见于AML。%1CD7常与CD34共表达，CD4见于M4、15。CD2+见于M4Eo,往往伴冇16号染色体异常。13亦可冇CD56+表达。正常粒细跑可表达CD1O。由此可见，单抗本身冇其多向性，勿轻易判断为杂合型白血病。%1T/B-ALL可分为儿个亚型，然而对临床价值不大。但若B-ALL伴有CD34表达时，应进一步作遗传学与基因检测，以确定是否是Ph+ALL,彳论是M-bcl

4、/abl或m-bcr/ablmRXA阳性者，其预后均较差，应接受大剂量化疗或早期接受异基因骨髓移植。1.3.2用CD45/SSC辅助设门提高免疫分型的准确性广I血病免疫分型是对骨髄或外周血屮的门血病细胞进行免疫标记，从而诊断门血病的类型。为此分型时如何提高设门的准确性至关重要。用FCM单参数测定的准确性不高。现今国际上通用的是CD45/SSC设门法，其目的是排除正常细胞的干扰，将不正常的细胞群孤立出来便于重点分析。其原理是CIM5是所冇白细胞的抗原，CD45表达量在成熟淋巴细胞最高，单核细胞、粒细胞、早期造血细胞依次减弱。红细胞(中、晚幼红细胞、成熟红细胞)不表达01)

5、45o侧向角光散射(SSC)反映细胞的颗粒性，成熟粒细胞SSC最高，依次为单核细胞、淋巴细胞、早期造血细胞、红细胞。以CD45/SSC典型图即可获得初步印象。若同时加上一个或二个以上其它单抗进行二、三色英至四色分析，则很容易识别非正常细胞群的表型，并排除正常细胞的干扰，当标本中幼稚细胞低于50%或检测残存白细胞时尤为必要。1.3.3口血病免疫分型的报告方式是否结合FAB形态学报告值得探讨。2、流式细胞术检测残存白血病细胞(MRD)白血病病人在获得血液学缓解后.体内还可存在1010以卞的白血病细胞。这样少量的细胞常规的显微镜不能测出。在强化治疗和维持治疗片可逐步减少，但难

6、以彻底清除，这是复发的根源。检测MRD是决定进一步治疗策略和选择采集外周血造血T-/祖细胞口体移植及进行界•基因骨髓移植时机的依据。2.1MRD检测方法的评价2.1.1常规染色体核型分析：可发现界常核型，但受分裂和多少的影响，灵敏度不高2.1.2荧光染色体原位杂交技术(FISH)：敏感度高,可检测间期细胞,敏感度可达1：103-4,但需特殊探针成本高。用FISH检测间期细胞染色体易位，常规可以分析上千个细胞，而易位的确切指标是标记不同荧光的两个基因并置，对于MRD来说，通常CR后白血病细胞仅占有1/1000,发现1-2个这类细胞就诊断MRD,证据不够有力。1.1.3PC

7、R/RT-PCR：敏感、快速、可半定量或全定量，敏感度可达1：104-5,但过于敏感，有时与临床不符。例如有的FABoM2或CIL病人虽RT-PCR阳性仍可长期无病存活。此外,选择标志不易，一些融合基因往往与目前临床广泛应用的形态学分型不能完全吻合，有时某种白血病的形态学类型不一•定出现某种标志。此外还应注意到克隆演变问题。2.1.4FCM:过去认为FCM测定残存白血病细胞不可靠，因为现用的McAb不能鉴别正常血细胞与白血病细胞。虽然至今尚未发现白血病细胞特异抗原，但近來有人提出根据白血病细胞的以下特征，FCM检测的皱感度可明显提高：2