流式细胞术在肿瘤临床和研究中的应用

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1、后记：苦心人，天不负，三千越甲可吞吴；有志者，事竟成,百二秦关终属楚。希望大家在工作中万事如意，心想事成。不要斤斤计较，快乐开心每一天！活的潇洒、自在。题记：看大地花开花落，望天空云淡云舒！悲催的80后，在这个悲催的时代，我们别无选择。参加工作几年了，积累了一些资no料，我曾经花费大量心血在网上下载.修改、有时候熬夜熬到凌晨2点多钟。现在，我把它们拿岀来，希望大家不要像我一样,花费时间、精力；到最后落个腰酸背疼。记住：不要后悔、彷徨、犹豫；时间就是金钱，效率就是生命！——谨以此文献给悲催的80后、90后流式

2、细胞术在肿瘤临床和研究中的应用周永列1・3免疫分型中的几个问题1.3.1单克隆抗体的选择白血病免疫分型时尽呈选用系列特异性强的单抗作为一线单抗，目前较为公认系列特异性单抗有T系的cyCD3,B系的cyCD79a>cyCD22和髓系的MPO、cyCD13等。一般说胞浆比胞膜的标志特异性强。用此特异性强的标志作为初筛，基本可确定T、B或髄系，然后再进-步分析。以下为各系列较特别的标志：AML：MPO、CD33、CD13、CD14CD15、CD11B、CD11CT-ALL：c/mCD3、CD2、CD5、CD7、C

3、D4/CD8、CD38B-ALL：cCD22、cCD79、CD19sCD10、CD24、HLA-DR>CD20、CD38造血干/祖细胞——D34、CD117、CD38、IILA-DR、AC133AML各亚型的免疫分型屮有时仍较难分辨，有以下特点可供参考：①CD41、CD61是巨核细胞的标志,见于FAB-M7,但血小板粘附于某细胞上可造成假阳性。②CD71与血型糖蛋白是红系的标志，见于FAB-M6型。③CD14、CD64是单核细胞的标志，见于M4或M5。①FAB-M3,t(15；17)者典型的免疫衣型是CD1

4、3+、CD33+、CD9+、CD38+、CD34-、DR-。②t(&21)M2的表型为CD13+、DR+、CD34+、CD33+、CD15+、CD19+或CD56+。③MO-UMl较难区分，应有髓系标志而无淋系标志，胞浆MPO应阴性。CD34及DR在M0较强，并可伴有CD7与CD4。④CD117+多见于AML。⑤CD7常与CD34共表达，CD4见于M4、15。CD2+见于M4Eo,往往伴有16号染色体异常。M3亦可有CD56+表达。止常粒细跑可表达CDlOo巾此可见，单抗木身有其多向性，勿轻易判断为杂合型

5、口血病。⑥T/B-ALL可分为几个亚型，然而对临床价值不人。但若B-ALL伴有CD34表达时，应进一步作遗传学与基因检测，以确定是否是Ph+Al丄，不仑是M-bcl/abl或m-bcr/ab1mRNA阳性者，其预后均较差，应接受大剂量化疗或早期接受异基因骨髓移植。1.3.2用CD45/SSC辅助设门提高免疫分型的准确性白血病免疫分型是对骨髓或外周血中的白血病细胞进行免疫标记，从而诊断白血病的类型。为此分型时如何提高设门的准确件至关觅要。用FCM单参数测定的准确牲不高。现今国际上通用的是CD45/SSC设门法

6、，其冃的是排除正常细胞的干扰，将不正常的细胞群孤立出来便于重点分析。其原理是CD45是所有白细胞的抗原，CD45表达量在成熟淋巴细胞最高，单核细胞、粒细胞、早期造血细胞依次减弱。红细胞(中、晚幼红细胞、成熟红细胞)不表达CIM5。侧向角光散射(SSC)反映细胞的颗粒性，成熟粒细胞SSC最高，依次为单核细胞、淋巴细胞、早期造血细胞、红细胞。以CD45/SSC典型图即可获得初步印象。若同时加上一个或二个以上It它单抗进行二、三色甚至四色分析，则很容易识别非正常细胞群的表型，并排除正常细胞的干扰，当标本中幼稚细胞

7、低于50%或检测残存白细胞时尤为必要。1.3.3白血病免疫分型的报告方式是否结合FAB形态学报告值得探讨。2、流式细胞术检测残存白血病细胞(MRD)白血病病人在获得血液学缓解后.体内还口J存在1010以下的门血病细胞。这样少量的细胞常规的显微镜不能测出。在强化治疗和维持治疗后可逐步减少，但难以彻底淸除，这是复发的根源。检测MRD是决定进一步治疗策略和选择采集外周血造血T-/祖细胞口体移植及进行界•基因骨髓移植时机的依据。2.1MRD检测方法的评价2.1.1常规染色体核型分析：可发现异常核型，但受分裂相多少的

8、影响，灵敏度不高2.1.2荧光染色体原位杂交技术(FISH):敏感度高，可检测间期细胞，敏感度可达1：103-4,但需特殊探针成本高。用FISH检测间期细胞染色体易位，常规可以分析上千个细胞，而易位的确切指标是标记不同荧光的两个基因并置，对于MRD来说，通常CR后口血病细胞仅占有1/1000,发现1-2个这类细胞就诊断MRD,证据不够有力。2.1.3PCR/RT-PCR：敏感、快速、可半定量或全定量，敏感度可达1