流式细胞术在临床血液学

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1、流式细胞术在临床血液学流式细胞术在临床血液学与医学科研中的应用陈军浩南京人学医学院附属南京鼓楼医院流式细胞仪基本工作原理光路系统液路系统电路系统流式细胞仪光路图外周血FSC-SSC点图荧光信号(FL1、FL2、FL3)滤光片红系成熟过程抗原表达B系成熟过程抗原表达T系成熟过程抗原表达粒系成熟过程抗原表达单系成熟过程抗原表达急性白血病免疫分型髓系标志：CD13、CD33、CD14、CD117、CD61、胞浆MPO。B系标志：CD19、CD10、CD22、CD20、胞浆CD22。T系标志：CD5、CD7、胞浆CD3。红系标志：C

2、D71、GlyA非系列标志：CD34、HLA-DR白血病细胞系列不保真性抗原跨系表达抗原表达不同步抗原表达过高、过低表达异常蛋口K0RSA3544CD66cCD19白血病细胞伴CD33表达细胞抗原表达过高、过低AML-M0/M1有低的SSC和FSC。在CD45-SSC图上出现在原始细胞位置上，至少表达一个特异性标志如CD13或CD33,但MPO比CD13与CD33更灵敏。也可表达CD7或CD4。HLA-DR、CD34阳性，有些研究表明CD7与CD34共表达在AML且预后差。流式上Ml与M0相似不易区分，Ml—般CD13+、C

3、D33+,但CD34表达可少于M0,可能表达部分CD150AML-M2M2与Ml的主要区别是成熟度增加，原始细胞减少，CD15表达较Ml显著，CD34弱于Ml。CD45-SSC图显示从髓系blast区至成熟骨髓细胞区的连续细胞带，CD45-SSC图有助于确定blasts比例。AML-M3高颗粒性，表现为较高的SSC,多数情况HLA-DR阴性或表达很少，CD34少于M2、一般CD13弱于CD33,大多表达CD117oM3v低颗粒性，表现为较低的SSC。AML-M4/M5两型表型相似，但M4较M5表达更多的CD34(+),CD4

4、5-SSC图上，不成熟细胞出现在单核区，重要的表型为CD13、CD33、HLA-DRCD14和CD15,CD33可表达强于CD13oAML-M6特征不明显,HLA-DR,CD34、CD13、CD33、CD19、CD22、CD5、CD7等均阴性，CD45-SSC图显示主要为CD45阴性区域为红系成份，高表达CD71。AML-M7巨核细胞白血病，在AML中少于1%。一般CD61（GpIIIa）和/或CD41（GpIIb-IIIa）阳性，特别而注意由于血小板粘附在blasts上造成的假阳性，B-ALLB-ALL淋巴细胞增生性疾病浆

5、细胞白血病浆细胞白血病T-细胞白血病T-细胞口血病胞浆CD3阳性慢性淋巴细胞口血病套细胞淋巴瘤边缘带B细胞淋巴瘤吞噬、加工、递呈抗原细胞吞噬功能检测DEX（Dextrans,右旋糖昔）。37°C,DEX-F1TC与活细胞共孵育lOmin。洗去细胞外多余的DEX-FITC。流式细胞仪检测FL1荧光强度的变化。细胞吞噬功能检测细胞吞噬功能检测的意义单核吞噬细胞系统是机体的最初防御系统，有清除或吞噬异物的能力。本试验可评价此系统的功能。癌症患者细胞吞噬功能减低。研究免疫抑制药物对细胞的作用。呼吸爆发中性粒细胞呼吸爆发肝素抗凝血。调

6、理后的细菌为刺激剂；PMA为强刺激剂；fMLP为弱刺激剂。37°C,刺激后细胞与二氢罗丹明（DHR）123孵育。流式细胞仪检测FL1荧光强度。中性粒细胞呼吸爆发呼吸爆发的意义慢性肉芽肿症（chronicgranulomatoiisdisease,CGD），患者的中性粒细胞和单核细胞吞噬细菌后不能产后呼吸爆发，不能杀灭摄入的致病菌。超氧阴离子可造成正常组织损伤。如类风湿关节炎。APC与T细胞的作用移植前后CD3阳性T细胞CD4/CD8细胞的表达移植前后CD3阳性T细胞CD8/CD28的表达移植前后CD4阳性细胞CD45RA/C

7、D45R0的表达人淋巴细胞CD154的表达Th1/Th2细胞检测（三色法）Thl/Th2细胞检测（四色法）特异性抗原激活淋巴细胞移植后免疫检测CD25较基础值高出10%,表明即将或已经发生排斥。HLA-DR增加10%,且不伴有CD25增加，提示巨细胞病毒感染。CD4/CD8小于0.2必须停用免疫抑制剂。流式细胞术CBAMHCI四聚体模式图每条MHC接有一个生物素链亲和素结合四个生物素微球蛋白维持MHC正确构象肽提供特异性结合四聚体较单体与CTL结合稳定BasicPentamerStainingProtocolMHCI四聚体技

8、术的意义四聚体复合物法具有精确的肽特异性。阳性细胞数量与CTL功能密切相关。分选出正染组细胞扩增，其阳性率由4%上升为90%；负染组仍为阴性。HBV肝内出现大量非HBV特异性淋巴细胞浸润。免疫接种效果监视。效应细胞对靶细胞的杀伤作用预先用CFSE染色K562靶细胞（发绿色荧光）。效应细胞与