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1、-A33启动子介导的溶瘤腺病毒携带IL24对结肠襄癌的抗癌作用研究浙江理工大学硕士学位论文浙江理工大学学位论文原创性声明本人郑重声明:我恪守学术道德,崇尚严谨学风。所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已明确注明和引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写,我对所写的内容负责,并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:日日期:年月学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交
2、论文的复印件和电子版,允许论文被查阅或借阅。本人授权浙江理工大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。-保密口,在??年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密口√。学位论文作者签名:指导教师签名:日日期:年月日期:年月Ⅱ浙江理工大学硕士学位论文启动子介导的溶瘤腺病毒携带.对结肠癌的抗癌作用研究摘要随着社会的发展和科学的进步,很多疾病已经能够治愈,恶性肿瘤则成为人类致死的头号杀手,是国际科研领域内投入最多、研究最深入的疾病之一。结直肠癌,作为人类高发恶性肿
3、瘤,其发病率一直呈上升趋势。在我国,结直肠癌死亡率已位于恶性肿瘤死亡率的第五位,严重危害人类健康。年,刘新垣院士提出的“癌症的靶向基因.病毒治疗这一新型肿瘤治疗策略,不仅解决了病毒在肿瘤内特异性增殖问题,而且融合了治疗基因协同杀伤肿瘤的双重优势。溶瘤腺病毒载体的靶向性和携带出色的肿瘤治疗基因是该策略发挥最佳疗效的关键。腺病毒复制最重要的元件是其区,特别是区,本-课题正是利用改造区序列,将区的碱基删除,贝。△,蛋白质不能与结合,抑制了细胞周期并促进病毒在肿瘤细胞中选择性地复制。黑色素瘤分化相关基因./白介素./.作为一种出色的肿瘤
4、治疗基因,具有多功能调节并诱导癌症细胞死亡的作用,由于它对肿瘤杀伤选择性高并对正常细胞没有毒害的特点而被用于本课题中。研究发现,人胃肠道上皮细胞表面的一种跨膜糖蛋白抗原具有很高的肠组织特异性,它已成为临床上单抗靶向治疗结肠癌研究的热点,而进一步研究其基因表达调控就有重要意义。这不仅可以从分子水平上阐明基因组织特异表达的机理,而且通过此研究还能为结肠癌基因靶向治疗提供一种新思路。本课题首先构建一个由启动子调控的双靶向结肠癌特异性增殖溶瘤腺病毒载体..△,再在此基础上携带一个抗癌基因.,构成我们策略中提到的靶向基因.病毒.?~△,以
5、期能够取得很好的抗结肠癌效果。实验结果表明.一△有一定的肿瘤杀伤能力,并对正常细胞毒副作用非常小,但对五种结肠癌细胞的杀伤作用并未明显高于其他四种肿瘤细胞。启动子调控的重组溶瘤腺病毒一.△在感染复数浙江理工大学硕士学位论文为时对肿瘤的杀伤效力并不强,在感染复数为时,九种细胞中存活率最低也仅为%左右。结果也显示目的病毒...~△比载体病毒.一~△对肿瘤的杀伤作用并没有明显增强。结果说明,启动子调控-重组腺病毒体外抗结肠癌特异性不明显,启动子活性不高。启动子活性及其调控机制有待进一步研究,从而改进实验思路,为结肠癌的靶向基因.病毒治
6、疗提高新的方案。关键词:启动子;.基因;靶向基因.病毒治疗;溶瘤腺病毒;结肠癌浙江理工大学硕士学位论文?。一‘,,,?.曲,..,””,..,,,,/.一/,晰,印.,,,浙江理工大学硕士学位论文.,..一,.,一一,,-.,,%...,,.,.:;;?;;浙江理工大学硕士学位论文缩略词缩写英文全称中文全称浙江理工大学硕士学位论文目录摘要缩略词目录??..第一章启动子介导的溶瘤腺病毒携带对结肠癌的抗癌作用研究.弓言??....缮直肠癌治疗的研究进晨?,,溶癯隙病毒在恶性髀瘤治疗韵研究进震?..基因在结肠癌靶向基因病毒治疗的应用?
7、.『..蟹述.-..细菌内同源重组法锄备腺病毒?....实验的的和意义..,.,.创新有??。,.实验材料.,..菌钴与赁慰.,..职唇毛瑟兰皇纪击:瓤.,..喾历罗荔多/≈夕弘,..扇劲潜..茄鲈??.,..角嗍堂钴?,,..主要实验绽器?,..主己要勺努勺翊爱笳影,.实验方法...重组质粒.?的构建...细菌内重组及鉴定..重组骤病毒的小量扩增及鉴定..病毒的大量扩增与纯化?....力萝香痂莎盎乎夕女‖:毫??.:??,..检溯及蛋白水平的表达....溶瘤豫病毒.??÷△体外抗瘤效果评价?..艿纺才学分析?...实验结果及分
8、析。..中间载体??△硼的鉴定结果..-..穿旋赁慰??,的鉴宕?。..穿梭质粒??△的签定?...匆廖访童:组缯祭签定??...重组骥疬毒.??△卅的鉴定..寓动子能有效驱动重组病毒早期基因蛋白在睁瘤细咆中的表达...?‘,△封在肿瘤细胞中能有效表达蛋白.。重
