基因溶瘤腺病毒sg655--sgm对胆管癌的抗肿瘤作用研究

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1、；军—_■◆露天署硕士学位论文基因溶瘤腺病毒SG655．SGM对胆管癌的抗肿瘤作用研究Theanti—tumoreffectofgenetransducedoncolyticadenovirusSG655一SGMtocholangiocarcinoma研究生姓名：指导老师：学科专业：学位类型：答辩日期：钱其军教授东方肝胆外科医院肿瘤学专业学位2O14年5月二O一四年五月上海★第二军医大学★东方肝胆外科医院独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不

2、包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：讥雳驾日期：叫妒年歹月-2日学位论文版权使用授权声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，第二军医大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文全文或部分内容编入《中国学位论文全文数据库》、《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》等数据库进行检索。可以采用影印、缩印或扫描等复制手

3、段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：晶耆考日期：矿丹年厂月五g曰导师签名：曰期：瓣9月髫曰目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1Abstract⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5第一章前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．6第二章溶瘤腺病毒SG655．SGM及其对照病毒SG655．SF和SG65

4、5一GM的构建及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12一、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12(一)实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．121、实验所需质粒、感受态和细胞株⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．122、引物合成⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．123、实验所需试剂的配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12(二)实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．141、p74一Tp-SGM质粒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、．．142、p74-Tp—SF质粒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯183、p74一Tp-GM质粒的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯244、质粒p74．TP．SGM、p74一TP—SF、p74一TP—GM的大量提取⋯⋯285、溶瘤腺病毒SG655．SGM、SG655．SF、SG655．GM的包装和鉴定．⋯⋯．⋯．⋯．⋯．⋯．⋯⋯⋯．．．⋯．⋯．⋯．⋯⋯．⋯．⋯．．⋯⋯．．⋯．⋯⋯⋯．⋯．．⋯．⋯⋯⋯．⋯．⋯．：196、病毒的大量扩增、纯化和滴度测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．32二、实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34(一)质粒构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯341、SGM、SF、GM结构模式图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯342、质粒pCAl9一SGM的鉴定结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．343、MCMV-SGM基因片段的获取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．354、质粒p74-TP—SGM的酶切鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．355、SF、GM基因片段的获取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．366、pCAl9骨架载体获取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．367、质粒pCAl9-SF

7、的酶切鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．368、质粒pCAl9一GM的酶切鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯379、MCMV-GM和MCMV-SF基因片段的获取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯381O、质粒p74-TP-SF酶切鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38ll、质粒p74一TP—GM酶切鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．39(二)溶瘤腺病毒SG655．SGM及其对照病毒SG655．SF、SG655．GM的鉴定、扩增、纯化、以及滴度测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯391、溶瘤腺病毒SG655．SGM的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯392、溶瘤腺病毒SG655．SF的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．403、溶瘤腺病毒SG655．GM的鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯404、溶瘤腺病毒的扩增、纯化与滴度测定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．40三、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯41第三章溶瘤腺病毒SG655．SGM对胆管细胞癌在体外的抗肿瘤作用研究42一