基因溶瘤腺病毒sg635-sf对卵巢癌的作用研究

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1、密级★保密期限：（涉密论文须标注）ZSTUZhejiangSci-TechUniversity硕士学位论文Master’sThesis中文论文题目:基因溶瘤腺病毒SG635-SF对卵巢癌的作用研究英文论文题目：Theanti-tumoreffectofgene-oncolyticadenovirusSG635-SFtoovariantumor学科专业：生物学作者姓名：刘品一导师名字：钱其军递交日期：2015年3月10日浙江理工大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，

2、是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：4‘二日期：年3月丨（日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江理工大学有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权逝江理学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手

3、段保存、汇编学位论文。学位论文作者签名：指导教师签名：签名日期:》详3月It日签名日期…化年3月丨日浙江理工大学硕士毕业论文基因溶瘤腺病毒SG635-SF对卵巢癌的抗作用研究基因溶瘤腺病毒SG635-SF对卵巢癌的抗肿瘤作用研究摘要背景：近年来，中国卵巢癌的发病率不断增加。由于早期卵巢癌缺乏典型症状和成熟的诊断，发现时一般已处于晚期。目前，对于癌症治疗手段非常有限，单靠手术，放疗化疗切除卵巢癌，效果很不理想。因此，迫切需要寻找一种新型的卵巢癌治疗手段。目前研究发现，免疫治疗能在肿瘤临床治疗中发挥巨大作用。溶瘤

4、腺病毒是一种较为常见的免疫治疗方法，可以提高针对肿瘤细胞的免疫治疗作用。溶瘤腺病毒是经过基因工程改造，能特异性感染肿瘤细胞并且能在肿瘤细胞中完成自我复制，导致肿瘤裂解的增殖型腺病毒。这种病毒缺乏正常细胞复制所必须的基因，所以对正常细胞不产生杀伤作用。CD47是一种细胞表面分子，是免疫球蛋白（Ig）超家族的一员，可以和整合素，血小板反应蛋白等蛋白结合，并参与细胞迁移，T细胞和树突细胞（DC）的激活，轴突发展等不同的生理过程。CD47和免疫逃避有关，能在很多肿瘤细胞表面高表达，其机制是和巨噬细胞表面SIRPα结合

5、后，可以释放“别吃我”信号，从而逃避巨噬细胞的吞噬作用，实现免疫逃避的目的。信号调节蛋白α(SIRPα)是抑制性受体，SIRPα表达相对受限于骨髓细胞，比如巨噬细胞，粒细胞，树突细胞等。SIRPα是参与调解白细胞功能的膜蛋白成员之一，CD47是其配体，两者构成SIRPα-CD47途径。在SIRPα-CD47途径中，表达于巨噬细胞表面的SIRPα和肿瘤细胞表面的CD47结合，将其识别为“自我细胞”，从而抑制了巨噬细胞的吞噬作用。SIRPα-CD47还能使巨噬细胞识别正常细胞和受损、老化细胞，使这部分细胞被清除。

6、结果：在本研究中，构建携带SIRPα（CV1）-IgG1Fc基因片段的溶瘤腺病毒SG635-SF，考察其对人卵巢癌细胞体外模型，裸鼠卵巢癌移植瘤体内模型的治疗效果。主要结果有以下6方面。1、成功构建溶瘤腺病毒SG635-SF。通过分子克隆技术成功构建了p74-TP-CCAU-SF质粒，包装成35型SG635-SF溶瘤腺病毒。2、SG635-SF溶瘤腺病毒能表达SF基因片段。WesternBlotting，ELISA实验结果表I浙江理工大学硕士毕业论文基因溶瘤腺病毒SG635-SF对卵巢癌的抗作用研究明，SG6

7、35-SF溶瘤腺病毒能成功表达SF融合蛋白。3、溶瘤腺病毒SG635-SF在卵巢癌细胞SK-OV-3，HO8910中有较强的增殖能力和杀伤作用。病毒增殖实验说明，SG635-SF和对照病毒SG635能在人卵巢癌细胞HO8910及SK-OV-3细胞中有效增殖，在48h时，增殖效率为100倍。MTT实验说明，相比于溶瘤腺病毒SG635，带外源基因SF的溶瘤腺病毒SG635-SF对人卵巢癌细胞有着更好的杀伤作用。4、融合蛋白SF能结合并封闭CD47。溶瘤腺病毒SG635-SF感染细胞后，依据流式细胞仪结果和免疫荧光

8、显微镜结果我们发现，SF融合蛋白能结合并封闭卵巢癌细胞HO8910及SK-OV-3表面的CD47。5、溶瘤腺病毒SG635-SF能诱导人卵巢癌细胞HO8910及SK-OV-3凋亡。用增殖型SG635，SG635-SF，非增殖型Ad-SF，Ad-blank感染HO8910细胞后，发现增殖型SG635-SF感染的细胞凋亡明显，说明，封闭人卵巢癌细胞上的CD47的确能有效引起该细胞凋亡。6、在体内实验中，