端粒酶为靶点的溶瘤病毒的抗肿瘤作用研究.pdf

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1、军事医学科学院院刊2007年6月第3l卷第3期228BuIIAcadMiIMedSci，un2007；VoI3lNo3端粒酶为靶点的溶瘤病毒的抗肿瘤作用研究l，3l4l333l李月敏，宋三泰，龙旭梅，江泽飞，廖国清，曲怕梅，解国清，葛飞娇，22!张滇，钱其军（l.军事医学科学院附属医院全军肿瘤中必，北京l0007l；2.第二军医大学东方肝胆外科医院病毒和基因治疗中必，上海200438；3.解放军总医院第二附属医院肿瘤科，北京l0009l；4.解放军医学图书馆，北京l00039）［摘要］目的：通过临床前体外实验研究观察溶瘤病毒CNHK300对各种乳腺癌细胞的持异性杀伤作用。方法：通

2、过TRAP-ELISA方法，确认各种乳腺癌细胞和正常成纤维细胞中的端粒酶活性。Western印迹检测腺病毒CNHK300ElA在端粒酶阳性肿瘤细胞和阴性正常成纤维细胞中的表达差异。通过荧光显微镜观察病毒在细胞中感染和复制的过程。行病毒增殖实验，验证溶瘤病毒CNHK300在端粒酶阳性乳腺癌细胞中选择性复制能力；MTT方法行细胞生长抑制实验，检测CNHK300对端粒酶阳性乳腺癌细胞的选择性杀伤能力。结果：各种乳腺癌细胞MCF-7、BT-549和SK-BR-3的端粒酶均为阳性，MRC-5和B细胞的端粒酶均为阴性。CNHK300病毒的ElA可以选择性在端粒酶阳性的乳腺癌细胞株和转染ElA

3、的293细胞中表达，而在端粒酶阴性的正常成纤维细胞株中不表达。CNHK300病毒可以选择性在乳腺癌细胞中复制并杀伤肿瘤细胞，而在正常细胞中复制明显减弱，同时杀伤作用明显下降。结论：本研究证明，hTERT启动子可以用于调控腺病毒ElA选择性在端粒酶阳性肿瘤细胞中表达，并调控病毒在肿瘤细胞中选择性复制，最后产生溶瘤作用。溶瘤病毒可能为肿瘤治疗提供一种新的有力武器。［关键词］溶瘤病毒；肿瘤；CNHK300；hTERT［中图分类号］R737.9［文献标识码］A［文章编号］l000-550l（2007）03-0228-05Telomerase-dependentoncolyticadeno

4、virusforcancertreatmentl，3l4l33LIYue-min，SONGSan-tai，LONGXu-mei，jIANGZe-fei，LIAOGuo-Oing，OUYi-mei，3l22!XIEGuo-Oing，GEfei-jiao，ZHANGOi，OIANOi-jun（l.CIinicaICancerCenter，AffiIiatedHospitaI，AcademyofMiIitaryMedicaISciences，Beijingl0007l，China；2.LaboratoryofViraIandGeneTherapy，EasternHepatobiIiar

5、ySurgicaIHospitaI，theSecondMiIitaryMedicaIUniversity，Shanghai200438，China；3.CancerCenter，The2ndAffiIiatedHospitaI，PLAGeneraIHospitaI，Beijingl0009l，China；4.MedicaILibraryofChinesePLA，Beijingl00039，China）［Abstract］Objective：TocarryoutaprecIinicaIstudyforassessmentofthespecifickiIIingeffectofrep

6、Iication-compe-tentadenovirusCNHK300oninuitrobreastcarcinomaceIIswithvariousbioIogicaIstatus.Methods：TeIomeraseactivityinvariousbreastcancerandnormaIfibrobIastceIIIineswasconfirmedbyTRAP-ELISA.DifferentceIIswereaddedwithCNHK300virusandthentheElAproteininthecytopIasmwasmeasuredbyWesternbIottin

7、g.FIuorescencemicroscopywasusedtoobservetheCNHK300-EGFPproIiferationaftertheceIIswerecuIturedandaddedwiththevirus.VirusproIiferationassaywasappIiedtoevaIuatetheproIiferationseIectivityofCNHK300.MTTmethodwasusedtoevaIuatethecytoIysisse-Iectivi