健步汤熏蒸法对膝骨性关节炎模型大鼠il—1、il—6与tnf—α表达影响探究

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1、健步汤熏蒸法对膝骨性关节炎模型大鼠IL—1、IL—6与TNF—α表达影响探究　　摘要：目的研究健步汤对膝骨性关节炎大鼠IL-1、IL-6和TNF-α表达的影响。方法以膝骨性关节炎（KOA）模型为研究对象，通过酶联免疫吸附试验法进行血清内IL-1、IL-6、TNF-α炎性细胞因子的含量检测，观察健步汤熏洗治疗KOA模型大鼠的实验治疗效果。结果与假手术组相比，模型对照组大鼠血清中含有的IL-1、IL-6及TNF-α炎性细胞因子均显著下降，说明造模成功。与模型对照组相比，健步汤治疗组大鼠血清中含有的IL-1、IL-6及TNF-α炎性细胞因子均显著升高。结论健步汤熏蒸法可以显

2、著提高膝骨性关节炎模型大鼠血清中的IL-1、IL-6和TNF-α的含量。关键词：健步汤；熏蒸法；膝骨性关节炎模型5骨性关节炎（OA）是一种以关节软骨损伤以至缺失，伴随软骨下及关节边缘骨质反应性增生，出现缓慢发展的关节疼痛、僵硬、肿大与活动受限为临床表现的常见疾病。在中医学中，其属于”骨痹”，”膝痹”等范畴。该病是老年人的常见病及多发病，其发病率与年龄存在正相关[1]。OA中膝关节骨性关节炎（KOA）的发病最为常见，随病情的发展，最终会导致膝关节疼痛，僵硬，活动受限，甚至废用。大量临床随机对照试验研究表明，中医药治疗KOA有着独特的优势，在其治疗方法中，健步汤治疗的中医

3、治疗方法在临床上有着显著疗效，有深入研究的必要。且目前KOA实验研究报道还比较少，健步汤对膝关节骨性关节炎治疗KOA的实验研究未见报道，因此本文以实验的方法探索中医药在膝关节骨性关节炎治疗上的疗效，进一步指导临床治疗[2]，阐明中医理论，具有重要的意义。1资料与方法1.1实验材料1.1.1实验动物SD雄性健康大鼠30只，体重（200±20g），清洁级，常温、自然光照、自由饮食水适应环境3d。1.1.2试验试剂水合氯醛，IL-1、IL-6、及TNF-α炎性细胞因子Elisa试剂盒，健步汤熏洗液，其余均为国产分析纯，所有用水均为双蒸水。1.2试验方法1.2.1分组及造模方

4、法5SD大鼠30只，随机取10只大鼠作为假手术组，即空白对照组，其余20只大鼠为模型组。取模型组20只大鼠，平均分为模型对照组及健步汤治疗组。然后对这20只大鼠采用改良的Murat法制备膝关节骨性关节炎模型。方法：4%木瓜蛋白酶溶液与0.3mol/L半胱氨酸溶液1：1混置30min，同时大鼠用10%水合氯醛，按0.4ml/kg腹腔麻醉后仰卧位固定于操作台，剃除大鼠左膝及其周围绒毛，擦洗洁净后用碘伏消毒。微屈大鼠左膝，以1ml注射器由髌骨内侧下方斜向上刺入关节腔，注入混合液20μL。造模第1，4，7d分别配制新鲜混合液注射，第7d注射后圈养大鼠4w。1.2.2治疗方法及

5、采样假手术组进行同期正常饲养。模型对照组按造模方法进行造模并正常饲养，无治疗。健步汤治疗组按造模方法造模同时使用健步汤熏洗治疗，取一剂健步汤方剂溶于2000mL水中，然后加热煮沸健步汤方药30min，然后进行熏洗膝关节30min，保留熏洗液倒回锅内药渣中，供下次熏洗使用，每剂药煎洗2次，2次/d。4w后进行实验取材，采用腹主动脉取血法迅速取全血并制备出相应的血清样品。1.2.3炎性因子检测按照试剂盒操作步骤进行各组大鼠血清中IL-1、IL-6、及TNF-α炎性细胞因子试验，采用酶标仪进行检测，然后进行数据统计，并分析结果。2结果5从表1可以看出，采用改良的Murat法

6、进行膝骨性关节炎大鼠造模后，与假手术组相比，模型对照组大鼠血清中含有的IL-1、IL-6及TNF-α炎性细胞因子均显著下降，说明造模成功。与模型对照组相比，健步汤治疗组大鼠血清中含有的IL-1、IL-6及TNF-α炎性细胞因子均显著升高，接近假手术组，说明健步汤熏蒸法可以显著提高膝骨性关节炎模型大鼠血清中的IL-1、IL-6和TNF-α的含量。3讨论在现代医学理论中，KOA被人们称为一种非特异性疾病，其主要表现是关活动受限、节疼痛及肿胀，其主要特征是软骨受到损害、功能退变及骨关节面周围形成新骨[3]。近年来发现，IL-1、IL-6、TNF-α都是机体免疫系统调节骨代谢

7、的主要蛋白质因子，是参与KOA发病中的几项重要因子。其中IL-1是通过诱导MMP基因表达从而刺激软骨细胞和骨膜产生MMPs，刺激软骨细胞和滑膜细胞产生NO，诱导关节软骨细胞的凋亡，促进软骨细胞和滑膜细胞产生PGE2，参与炎症反应。另有文献资料显示IL-1可以通过IL-6的介导作用来抑制软骨糖蛋白物质的合成，从而促进成纤维细胞和基质微分子的降解作用，最终加重了软骨的损伤。TNF-α是一种来源于巨噬细胞、纤维母细胞和软骨细胞中的炎性因子，它和IL-1一样是通过抑制软骨基质合成、诱导MMP产生而在OA的软骨破坏中发挥了重要作用。IL-1炎性因子在TNF-α