ggcx对兔骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响及其对il-1β、tnf表达的影响

《ggcx对兔骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响及其对il-1β、tnf表达的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号：密级：UDC：学号：406521212463南昌大学硕士研究生学位论文GGCX对兔骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响及其对IL-1β、TNF表达的影响EffectofGGCXonrabbitcartilagecellapotosisinosteoarthritisandexpressionofIL-1β、TNF廖邦强培养单位（院、系）：南昌大学第二附属医院指导教师姓名、职称：陈伟高教授主任医师申请学位的学科门类：医学专业领域名称：外科学（骨外）论文答辩日期：2015年6月答辩委员会主席：评阅人：2015年6月I一、学位论文独创性声明本人声明所呈交的学

2、位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南昌大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名（手写）：签字日期：年月日二、学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解南昌大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关

3、数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编本学位论文。同时授权北京万方数据股份有限公司和中国学术期刊（光盘版）电子杂志社将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》和《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》中全文发表，并通过网络向社会公众提供信息服务，同意按“章程”规定享受相关权益。学位论文作者签名（手写）：导师签名（手写）：签字日期：年月日签字日期：年月日论文题目姓名学号论文级别博士□硕士□院/系/所专业E_mail备注：□公开□保密（向校学位办申请获批准为“保密”，年月后公开）I摘要摘要研究目的：探讨慢病毒介导的γ谷氨酰基羧化酶（Vi

4、taminKdependentgamma-glutamylcarboxylase，GGCX）基因对兔骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响，以及对白细胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）、肿瘤坏死因子（Tumornecrosisfactor，TNF）表达的影响，从而为GGCX基因运用于骨性关节炎临床治疗提供理论依据。研究方法：1、选取12只雄性日本大耳兔采用膝关节前交叉韧带切断术构建模型，6周后将构建好模型兔处死，并进行软骨细胞的分离，培养，运用Ⅱ型胶原纤维染色和AlcianBlue染色法对培养的软骨细胞进行鉴定。2、将培养好的软骨细胞随机分

5、成三组：空白对照组（不作处理）、阴性对照组（转染不含GGCX慢病毒）、转染组（转染含GGCX慢病毒）。运用qRT-PCR及Westernblot检测各组软骨细胞中GGCX、Ⅱ型胶原、TNF、IL-1βmRNA及蛋白表达水平。3、采用AnnexinV-FITC&PI法检测上述各组细胞凋亡情况。研究结果：1、第1代骨性关节炎兔软骨细胞呈多角形扁平状，可有多个突起，Ⅱ型胶原纤维染色后可见细胞及细胞外基质呈黄色或棕黄色，AlcianBlue染色后可见细胞呈现天蓝色。2、qRT-PCR和Westernblot检测结果示：转染组GGCX及Ⅱ型胶原mRNA及蛋白水平

6、表达较空白对照组及阴性对照组明显升高，差异有统计学意义（P＜0.05），空白对照组及阴性对照组无明显差异（P＞0.05）；转染组TNF、IL-1βmRNA及蛋白水平表达较空白对照组及阴性对照组明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），空白对照组及阴性对照组无明显差异（P＞0.05）。3、AnnexinV-FITC&PI法检测各组凋亡率结果示：转染组凋亡率为(17.833±2.577)%，较空白对照组（25.467±2.511)%及阴性对照组（26.167±2.616)%明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05），空白对照组及阴II摘要性对照组无明显差

7、异（P＞0.05）。结论：1、膝关节前交叉韧带切断术可以成功构建骨性关节炎模型，并可以分离及培养出骨性关节炎软骨细胞；2、转染含GGCX慢病毒可以明显增加软骨细胞GGCX、Ⅱ型胶原的表达；3、转染含GGCX慢病毒可以明显降低软骨细胞TNF、IL-1β的表达；4、转染含GGCX慢病毒后可以抑制骨性关节炎软骨细胞凋亡。关键词：膝关节骨性关节炎；γ谷氨酰基羧化酶；肿瘤坏死因子；Ⅱ型胶原；白介素-1β；凋亡；IIIAbstractABSTRACTObjective:ToinvestigatetheeffectofGGCXmediatedbylentivirus

8、onrabbitcartilagecellapotosisinosteoarthritisan