康健关节葆对兔膝骨性关节炎软骨组织ⅱ型胶原表达的影响

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1、学院代号10716学号010021421101专业代码100602密级陕西中医学院ShaanxiUniversityofChineseMedicine硕士学位论文康健关节葆对兔膝骨性关节炎软骨组织Ⅱ型胶原表达的影响学位申请人徐建涛专业名称中西医结合临床申请学位类型临床医学硕士专业学位指导教师姓名李智斌主任医师论文提交日期2013年4月陕西中医学院学位论文独创性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任

2、何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果并由本人所承担的法律责任。学位论文作者签名＿＿＿＿＿日期：年月日关于学位论文使用授权的声明陕西中医学院有权保留使用本人学位论文，同意学院按规定向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权陕西中医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公布（包括刊登）论文的全部或部分内容。（保密论文在解密后应遵守此规

3、定）论文作者签名＿＿＿＿＿日期：年月日论文导师签名＿＿＿＿＿日期：年月日摘要目的：采用免疫组化法测定Ⅱ型胶原在兔子膝骨性关节炎模型中关节软骨的表达，探讨自拟方康健关节葆对关节软骨修复和保护的可能机制，并阐明该药在保护关节软骨和改善关节功能等方面的作用，为该药在临床上推广治疗膝骨性关节炎，提供实验及其理论依据。方法：1、分组和造模健康新西兰大白兔50只，雌、雄各半，将其按体重从轻到重进行编号，按随机数字表随机分为5组。A：空白组，B：模型组，C：氨基葡萄糖组（西药对照组），D：壮骨关节丸组（中药对照组）、E：康健关节葆组（实验组），每组10只。

4、常规饲养7天后，除空白组以外，余组将4%木瓜蛋白酶生理盐水溶液0.1ml[1]注射进兔右后膝关节腔内，建立兔膝骨关节炎模型。2、给药在造模的同时空白组和模型组每日以10ml的生理盐水灌胃；西药对照组每日以10ml（0.06g/ml）的氨基葡萄糖水溶液灌胃；中药对照组每日以10ml（0.07g/ml）的壮骨关节丸水溶液灌胃；实验组每日以10ml（0.07g/ml）的康健关节葆合剂灌胃，每日两次，共4周。期间常规饲养，不限饮食。3、灌胃结束后，用刀片按解剖结构切开兔右后膝关节，切取胫骨内侧髁软骨组织。4、肉眼观察兔膝关节大体情况；光镜观察软骨HE

5、染色切片；免疫组化法检测软骨组织切片Ⅱ胶原的表达水平。结果：1、肉眼观察A组兔膝关节无充血、水肿，关节液透明，关节软骨呈蓝白色并半透明，表面光滑、无缺损，触之有弹性；B组兔膝关节充血水肿，关节液呈浅黄、混浊、量多，关节软骨的形态学改变明显，软骨不透明，颜色呈黄色，表面不完整、粗糙，触之缺乏弹性，负重区有较大面积的糜烂溃疡面及裂隙，可达全层软骨，且少数软骨剥脱，致使软骨下骨外露，周围骨赘生成；C、D、E组兔膝关节轻度肿胀，少量充血，关节液呈淡黄色、量较少，关节软骨透明度降低，少关泽，小面积的糜烂、缺损，仅限于软骨浅、中层，未见软骨下骨裸露，周围

6、可见少量的骨赘形成。其中，E组与C、D组比较退变较轻。2、光镜观察软骨HE染色切片A组软骨细胞结构分层清晰，排列整齐，细胞分化好，潮线完整，未见裂纹、缺损，无细胞增生性改变；B组软骨细胞结构分层紊乱，表面有碎裂、塌陷，数量减少，可见溃疡病变，裂隙深达移行层，潮线不完整；C、D组软骨表面不规则，细胞弥散性增多，可见轻度的软骨缺损，潮线尚完整E组软骨结构分层尚可，软骨细胞增殖、分化尚正常，潮线较完整。3.模型组软骨Ⅱ型胶原OD值较空白组明显降低（P＜0.05）；康健关节葆组、氨基葡萄糖组、壮骨关节丸组Ⅱ型胶原OD值较模型组明显升高（P分别为0、0

7、.034、0.026）；康健关节葆组Ⅱ型胶原OD值高于氨基葡萄糖组、壮骨关节丸组（P分别为0.034、0.043）；氨基葡萄糖组Ⅱ型胶原OD值与壮骨关节丸组比较（P=0.915），无明显差异。结论：康健关节葆能增加Ⅱ型胶原在兔膝骨关节炎模型软骨细胞中的表达，以减低及延缓兔膝骨关节炎模型中软骨的破坏。结果表明康健关节葆在兔膝骨关节炎的作用机理与调节软骨细胞因子水平有关，这可能是该药修复受损软骨和保护未受损的软骨作用机制之一。为康健关节葆在临床治疗OA提供了理论依据。关键词：骨性关节炎；康健关节葆；Ⅱ型胶原；Kangjianguanjiebaor

8、abbitkneeosteoarthritiscartilagetissueexpressionoftypeIIcollagenAbstractObjective：