疏肝祛淤方对兔膝早中期骨性关节炎软骨的影响论文

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1、疏肝祛淤方对兔膝早中期骨性关节炎软骨的影响论文黄肖华段戡,朱少廷,张锡流,袁长深郝华【摘要】目的探讨以“疏肝郁、祛膝淤”为原则组方的膝舒汤对膝早中期骨性关节炎软骨的影响机理。方法选择成年健康日本大耳白兔30只，雌雄不限，体重2.5～3.0kg，随机分出未造模10只为正常组，20只通过结扎股静脉造膜8周后随机分为模型组和中药治疗组，每组10只。中药治疗组以膝舒汤灌胃，模型组以生理盐水灌胃。于实验开始后10，12周两个时相过量麻醉处死.freell相当生药12g。生理盐水，广西南宁百会药业集团有限公司生产，批号0608012。青霉素钠，华

2、北制药股份有限公司生产，批号X0601318。20%乌拉坦，中国医药集团上海化学试剂公司，批号20031216。1.3仪器切开包，灌胃器，切片机，显微光镜，组织脱水机，组织包埋机，漂烘处理仪，恒温培养箱，石蜡切片机，Olympus摄影显微镜，OlympusCH-2光学显微镜等。2方法2.1动物分组日本大耳白兔30只，随机分出未造模10只为正常组，20只造模8周后随机分为模型组和中药治疗组，每组10只。2.2造模原理结扎股静脉，造成静脉瘀滞，骨内压升高，使其形成膝早中期骨关节炎模型。2.3造模方法20%乌拉坦4ml/kg体重，行耳缘静脉

3、麻醉。将大耳白兔仰卧固定在兔台上，以右腹股沟中点以下约1.0cm为中心，作0.5cm的纵行切口，分离股静脉，分别在远、近端双重结扎股静脉，在两道结扎线间将股静脉剪断，逐层缝合皮下组织及皮肤。术后青霉素肌注抗炎3d，分笼饲养，1周后拆线。造模8周后开始治疗。2.4给药根据Meeh-Rubner公式计算兔的给药剂量，中药治疗组予膝舒汤，1剂/d，相当于生药12g·kg-1·d-1，配成30ml，分早晚两次灌胃；模型组给予生理盐水30ml，分早晚两次灌胃。2.5取材于实验开始后10，12周分批予过量麻醉处死，每组每批各5只。打开关节腔进行大

4、体观察。然后切取股骨髁下面全层关节软骨。2.6病理切片制作及染色石蜡切片制作：取材后的标本经4%多聚甲醛溶液固定24～48h，递增浓度乙醇脱水，石蜡包埋，间断连续切片（切片方向：与软骨表面垂直），厚3μm。苏木精-伊红(HE)染色，光镜下组织学观察。2.7结果评分股骨髁下面关节软骨组织学观察采用Mankin评分［2］。2.8统计学处理所有实验数据采用SPPS10.0软件进行分析，以±s表示，采用t检验。3结果3.1关节软骨大体观察正常组：两个时相取材时观察白兔关节软骨外观均呈淡蓝色，色泽明亮，边缘规整，无裂纹及软化。模型对照组：第1次

5、取材，白兔关节软骨失去原有光泽，变暗淡，触之较软，滑膜稍充血，轻度增生，粘连轻；第2次取材，白兔关节软骨失去原有光泽，变暗，触之软，滑膜充血轻，增生不明显，粘连轻。中药治疗组：第1次取材时关节软骨有光泽，色淡，触之稍软，滑膜无充血，轻度增生，粘连轻；第2次取材时观察白兔关节软骨外观呈淡蓝色，色泽亮，边缘规整，无裂纹。3.2关节软骨病理学评价见表1～2。表1实验开始8周后继续以下处理2周的结果及Mankin评分值（略）中药（灌服2周）治疗组与生理盐水（灌服2周）模型对照组比较，P＜0.01，与正常组比较，P＜0.01；n=5表2实验开始

6、8周后继续以下处理4周的结果及Mankin评分值（略）中药（灌服4周）治疗组与生理盐水（灌服4周）模型对照组比较，P＜0.01，与未造模空白组比较，P＞0.05；n=5中药灌服2周软骨恢复明显，与模型生理盐水灌服2周相比明显改善，P＜0.01，说明两组间有显著性差异；但与正常组同时期相比软骨修复未接近正常，P＜0.01，说明两组间有显著性差异。中药灌服4周软骨修复显著，表层软骨细胞多，软骨面平整，层次清晰，潮线清楚明显，软骨细胞馅窝清晰，细胞饱满，细胞核大，胞浆丰富，基质呈酸性（见图1）。模型组生理盐水灌服4周，软骨表面有破坏，凹凸不

7、平，表层软骨细胞少，细胞层次不清，软骨细胞馅窝不清晰，胞浆少，基质偏碱性（见图2）。正常组表层软骨细胞多，排列均匀，软骨面平整，层次清晰，软骨细胞馅窝不清晰，细胞饱满，细胞核大，胞浆丰富，基质偏碱性（见图3）。中药灌服4周与模型组生理盐水灌服4周相比软骨明显改善（P＜0.01），说明两组间有显著性差异；与未造模正常组同时期相比软骨修复接近正常（P＞0.05），说明两组间无显著性差异。图1中药治疗组（200×）（略）图2生理盐水对照组（200×）（略）图3正常组（200×）（略）4讨论4.1血淤、骨内压与骨性关节炎的关系在临床中常见的股

8、骨头缺血坏死、腕舟骨缺血坏死、距骨缺血坏死，都会导致软骨退变、缺损，由此可认识到软骨下骨的血运状况对软骨的退行变性产生重要影响。1972年Arnoldi等［3］认为骨内静脉淤滞可使骨内压升高，并引起膝关节疼痛。此后国内外