仙灵骨葆对兔膝骨性关节炎治疗作用的研究

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1、仙灵骨葆对兔膝骨性关节炎治疗作用的研究：程潭，张柳，李震，李强，穆树林，田发明，刘永强【摘要】[目的]研究仙灵骨葆(xianlinggubao,XLGB)对兔骨性关节炎关节软骨及软骨下骨的保护作用。[方法]30只3个月龄雄性日本大耳白兔，随机分为对照组(Sham)、盐水组(ACLT+NS)和仙灵骨葆组(ACLT+XLGB)，每组各10只。盐水组和仙灵骨葆组行右膝关节前交叉韧带切断术(anteriorcruciateligamenttransaction,ACLT)造成膝骨性关节炎模型。术后仙灵骨葆组125mg/(kg·d)灌胃;盐水组则给予等剂量生理盐水。6周后处死动

2、物，取股骨测量骨密度，之后脱钙制片，行HE染色、Mankin评分及BMP-2、MMP-13免疫组化染色;取右膝胫骨近端包埋，制成硬组织切片，用于骨组织形态计量学测量。[结果](1)Mankin评分：仙灵骨葆组显著低于盐水组。(2)股骨远端骨密度及胫骨近端软骨下骨骨量：仙灵骨葆组均显著高于盐水组。(3)免疫组化：仙灵骨葆组MMP-13的表达显著低于盐水组，BMP-2的表达显著高于盐水组。[结论]仙灵骨葆125mg/(kg·d)灌胃能够部分阻止骨关节炎兔关节软骨的退变，其作用机制可能与下调MMP-13的表达，上调BMP-2的表达，同时增加软骨下骨骨量，改善其微观结构有关。

3、【关键词】仙灵骨葆;骨性关节炎;软骨细胞;软骨下骨;BMP-2;MMP-13　　Abstract:[Objective]ToassesstheprotectiveeffectsofXianlinggubaoonarticularcartilageandsubchondralboneinexperimentalosteoarthritisinducedbyanteriorcruciateligamenttransaction(ACLT)inrabbits.[Methods]ThirtyhealthyJapaneselyintothreegroups:shamgroup,

4、ACLT+XLGBgroupandACLT+NSgroup.RabbitsinACLT+XLGBgroupandACLT+NSgroupreceivedanteriorcruciateligamenttransection(ACLT)ontherightknee.Rabbitsinshamgroupreceiveduntreatmentascontrol.ACLT+XLGBgroupreceivedadailyadministrationofXLGBatadoseof125mg/kgofbodyedose.Allrabbitsoraoved,measuredforbo

5、nemineraldensity(BMD),andthenacro-pathologicchangesmunostaining.Thesubchondralboneofrighttibialplateaueasurementofbonehistomorphometry.[Results](1)TheMankin’sscoreinACLT+XLGBgrouporaandsubchondralbonemassofproximaltibiainACLT+XLGBgroupinistrationofXLGBatadoseof125ug/kg/dfor6provingthest

6、ructureofsubchondralboneandreducingthedegradationofcartilagematrix.　　Key)、盐水组(ACLT+NS)和仙灵骨葆组(ACLT+XLGB)。盐水组和仙灵骨葆组行右膝关节前交叉韧带切断术(anteriorcruciateligamenttransaction,ACLT)。造模术后，ACLT+XLGB组行每日1次仙灵骨葆(贵州同济堂公司)灌胃125mg/(kg·d)，ACLT+NS组给予等量生理盐水灌胃。Sham组只打开右膝关节，不行前交叉韧带切断术,缝合膝关节。　　1.2标本采集和处理　　三组实验动物于

7、6周后处死并取材。将胫骨近端固定于70%酒精，冠状面锯开胫骨，脱水固定，经甲基丙烯酸甲脂包埋，作5μm切片，Giemsa染色。采用骨组织形态计量学方法测量软骨下骨骨小梁。股骨远端测量骨密度，股骨髁置于4%多聚甲醛中固定，15%EDTA-2Na溶液脱钙，石蜡包埋，作4μm连续切片。行HE染色、BMP-2和MMP-13免疫组化染色。　　1.3免疫组织化学(SABC法)　　4μm连续切片，平铺于涂有多聚赖氨酸的载玻片上，烤片4h，脱蜡至水。3%过氧化氢冲洗10min，PBS冲洗3次×5min，复合酶37℃修复10min。滴加抗兔BMP-2和MMP-13多克