川芎嗪对il-1β诱导的兔原代软骨细胞生长与凋亡的影响

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1、重庆医科大学硕士学位论文川芎嗪对IL--1β诱导的兔原代软骨细胞生长与凋亡的影响姓名：黄建花申请学位级别：硕士专业：中西医结合临床指导教师：何英201205重庆医科大学硕士研究生学位论文川芎嗪对IL一113诱导的兔原代软骨细胞生长与凋亡的影响摘要目的通过IL．1p诱导兔原代软骨细胞，模拟OA时软骨细胞所处的病理环境，观察川芎嗪对兔原代软骨细胞的活力及iNOS、NO的表达差异，探讨川芎嗪对IL．113诱导软骨细胞增殖与凋亡的影响，为川芎嗪应用于临床防治骨性关节炎软骨的进行性退变提供实验与理论依据。方法1．实验分组：对照组、IL—113

2、10ng／ml组、IL．11310ng／ml+TMP5ug／ml组、IL一11310ng／ml+TMPlOug／ml组、IL一11310ng／ml+TMPl5ug／ml组及IL一11310ng／ml+TMP20ug／ml组。2．应用机械一酶联消化法取软骨细胞，构建体外原代软骨细胞培养体系，进行软骨细胞鉴定。3．用IL—11310ng／ml和／或不同浓度川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48h后，用流式细胞仪检测软骨细胞生长周期及凋亡率；用MTT法检分别24h、48h及72h的软骨细胞的生长活力；4．实验分组处理48h后用RT-PCR和免疫组

3、化检测iNOS基因及蛋白表达；用硝酸还原法检测细胞培养上清液NO的表达。重庆医科大学硕士研究生学位论文结果1．镜下软骨细胞贴壁后变形呈三角形或多角形，有明显突起，核仁明显。甲苯胺蓝染色于胞质中可见蛋白多糖异染为蓝紫色颗粒，胞浆有红色II型胶原荧光表达，少见于胞核。2．用IL—l[310ng／ml和／或不同浓度(5，10，15，20ug／m1)川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48h后，与对照组比较，IL．1p诱导下软骨细胞被明显阻滞在G1期，并且生长活力明显下降(P<0．01)；DilX)ll芎嗪能明显降低IL—lp对软骨细胞G1期的阻滞作

4、用，细胞增殖指数、细胞活力明显增加(尸

5、)及减少细胞G1的百分比有关，从而促进细胞生长。2．川芎嗪能有效抑制IL—lp诱导兔软骨细胞凋亡，减少iNOS‘的表达和NO的合成。关键词：川芎嗪；IL．113；软骨细胞；增殖；凋亡4重庆医科大学硕士研究生学位论文EFFECTOFTETRAMETHYLPYRAZINEONPROLIFERATIONANDAPoPTOSIS0FRABBITARTICULARCHoNDRoCYTESINDUCEDBYIL一1BobjectiveABSTRACTThisresearchthroughtheIL—lbeta(IL一1p)reducedrabb

6、itprimarychondrocyte，andsimulatedthepathologyenvironmentofosteoarthritis(OA)，addingtetramethylpyrazine(TMP)coculture，viability,iNOSandNOexpressiondifferencesofrabbitprimarychondrocytewereobservated．OnIL一1pinducedcartilagecellproliferationandapoptosis，asappliedtoclinica

7、ltreatmentofTMPosteoarthritiscartilagedegenerationofexperimentalandtheoreticalbasis．ToinvestigatetheeffectsofTMPonIL一113inducedchondrocyteproliferationandapoptosis．andprovideexperimentalandtheoreticalbasisofTMPonclinicalapplicationforthepreventionandtreatmentofosteoart

8、hritiscartilageprogressivedegeneration．Methods1．Experimentalgroups：controlgroup，IL—lplOnghrdgroup，IL-lD10ng／ml+TMP5ug