麝香乌龙丸对兔骨关节炎软骨细胞凋亡的影响

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1、麝香乌龙丸对兔骨关节炎软骨细胞凋亡的影响【摘要】目的观察麝香乌龙丸对兔膝骨关节炎软骨细胞凋亡和凋亡调控基因bcl-2及其抑制基因bax的影响,探讨麝香乌龙丸对关节软骨的保护作用是否与抑制细胞凋亡与调节bcl-2及bax的表达有关。方法选用健康日本大耳白兔30只，随机分成正常对照组、造模组、麝香乌龙丸组。用1.6%木瓜蛋白酶膝关节腔内注射，建立兔膝骨关节炎模型，4周后处死全部动物，取右膝关节胫骨内侧髁软骨，软骨组织切片用TUNEL法检测软骨细胞凋亡，免疫组化法检测关节软骨中bcl-2、bax的水平。结

2、果麝香乌龙丸组细胞凋亡率明显低于造模组（P＜0.05），bcl-2在麝香乌龙丸组中的表达高于造模组（P＜0.05），bax的表达低于造模组（P＜0.05）。结论麝香乌龙丸通过上调bcl-2的表达，下调bax的表达，达到抑制兔实验性膝骨关节炎软骨中软骨细胞的过度凋亡，这可能是该药治疗骨性关节炎机制之一。【关键词】麝香乌龙丸；膝骨关节炎；细胞凋亡　　Abstract：ObjectiveToobservetheeffectofShexiang-pactsuppressorgenebax.Toexplore

3、therelationshipofShexiang-alerabbitslydividedintothreegroups:A.normalcontrolgroup,B.modelgroup,C.Shexiang-odelsbyinjectingpapaintotherightkneesofrabbits,after4alsedialtibialcondylecartilage.Cartilagetissuemunohistochemistryofarticularcartilageinthebcl-

4、2,baxlevel.ResultsTherateofapoptosisofthegroupCaybeonemechanismofShexiang-entofKOA.　　Keyg）将兔麻醉后，造模组和麝香乌头丸组均于右膝关节处剔毛，碘伏消毒，将关节轻弯，经髌腱内侧进针，关节腔内注射1.6%木瓜蛋白酶生理盐水溶液0.5ml,隔3d注射1次,共注射3次。期间动物用标准饲料正常饲养。　　2.3给药造模成功后第2天开始给药。麝香乌龙丸组按成人每日每千克体重用药量的6倍剂量作为大耳白兔每日每千克体重的等效剂量

5、(麝香乌龙丸0.6g/kg)，溶于10ml生理盐水中灌胃，1次/d；正常组和造模组灌入等量生理盐水；灌胃4周。　　2.4标本采集及处理于末次给药后24h以气栓法处死动物，逐层切开膝关节，切取胫骨内侧髁软骨，10%中性福尔马林溶液固定后,石蜡包埋，切片，用TUNEL法及免疫组织化学法检测。　　2.5数据处理细胞凋亡及免疫组化结果均采用方差分析,运用SPSS13.10统计学软件进行分析。　　4讨论　　骨性关节炎（osteoarthritis，OA）是一种慢性、渐进性、退行性的关节病变。骨性关节炎在所有关

6、节炎中是最常见的，随着年龄的增长，患病率逐渐增加，严重影响着中老年人的健康和生活质量。骨性关节炎的病因及发病机制目前尚不明确，其基本病理改变为多种致病因素引起的进行性关节软骨变性、破坏及丧失。近年来的研究显示，软骨细胞的过度凋亡可能是OA发病的重要原因［2］，因此抑制软骨细胞凋亡成为防治骨性关节炎的重要途径。软骨细胞凋亡的调控途径，目前研究较多的是Fas途径和NO途径，对于bcl-2基因家族的研究相对较少。表2麝香乌龙丸对软骨细胞bcl-2、bax阳性率的影响（略）　　细胞凋亡是一个正常的生理过程，

7、是一种由基因调控的主动地去除非需要或损伤细胞的程序性死亡过程，然而过度凋亡则是病理性的。TUNEL技术在原位对凋亡的软骨细胞检测发现OA病人的软骨细胞凋亡明显高于正常人［3］。软骨细胞凋亡是受凋亡相关癌基因调控的。bcl-2基因家族是细胞凋亡的重要调控基因，在细胞凋亡的过程中处于调控机制的终末部分，该基因家族在维持细胞生理性分化发育和细胞数量的动态平衡中具有重要作用。其中bcl-2基因所编码的bcl-2蛋白，能阻止多种因素诱导的凋亡。而bax是与bcl-2作用相互拮抗的基因，它们结构上具有一定同源性

8、，可相互结合形成二聚体。bcl-2的过量表达时，形成bcl-2同源二聚体，能抑制细胞凋亡，细胞受到保护［4］;而bax的过度表达，则可以与bcl-2形成异源二聚体，拮抗bcl-2抑细胞凋亡的作用［5］，那么细胞就走向凋亡。　　骨性关节炎属于中医“骨痹”“痛痹”等范畴，其发病与年老肝肾亏虚、外感风寒湿邪密切相关，最终导致关节气血、痰瘀凝滞而发病。《内经》说：“风寒湿三气杂至，合而为痹”；《证治准绳》云：“（膝痛）有风、有寒、有闪挫、有瘀血、有痰积，皆实也，肾虚其本也。”