茅莓黄酮体外抗氧化活性探究

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1、茅莓黄酮体外抗氧化活性探究　　摘要：为了研究茅莓（RubusparvifoliusL.）不同部位（根、茎、叶）中总黄酮的体外抗氧化活性，试验分别考察了茅莓根、茎、叶中总黄酮对羟自由基（·OH）、超氧负离子（O2-）、有机自由基（DPPH·）的清除能力及对大鼠肝组织匀浆自发性脂质过氧化反应产物丙二醛（MDA）的抑制率。结果表明，茅莓各部位黄酮在一定浓度范围内，其清除羟自由基（·OH）、超氧负离子（O2-）、有机自由基（DPPH·）及抑制MDA的作用均呈量效关系。说明茅莓根、茎、叶中总黄酮均具有一定的体外抗

2、氧化活性。关键词：茅莓（RubusparvifoliusL.）；总黄酮；抗氧化活性中图分类号：R284.2文献标识码：A文章编号：0439-8114（2013）23-5828-04茅莓（RubusparvifoliusL.）又名红梅消、天青地白草等，系蔷薇科悬钩子属植物茅莓（Rubusparvifolius10L.）的干燥全草。本品为民间常用草药，落叶小灌木，生于山坡、路旁荒地、灌丛和草丛中，适应性强，资源十分丰富，分布于河北、山西、陕西、四川以及中南和华东各省[1]。茅莓根、茎、叶均可作药用，具有清热

3、凉血、止血、散结止痛、利尿消肿等功效[2]，其化学成分有皂苷[3，4]、黄酮[5]、酚酸类物质[6]、萜类[7]以及挥发油[8]等多种成分。研究发现茅莓根、茎、叶中均含有黄酮类物质，黄酮类化合物具有良好的抗氧化性能，具有清除人体中超氧离子自由基、抗衰老和增加机体免疫力、降血压、降血脂、增进冠状动脉血流量、软化血管和防治冠心病、心绞痛及抗肿瘤等功能[8-11]。茅莓的诸多功效与其所含的黄酮类化合物有着密切的联系，目前鲜见对茅莓不同部位总黄酮抗氧化活性的研究报道。本试验通过对茅莓根、茎、叶总黄酮体外抗氧化活

4、性的研究，旨在为茅莓资源进一步合理综合利用提供依据。1材料与方法1.1材料与仪器茅莓采自山东烟台昆嵛山国家级自然保护区，经滨州医学院中西医结合学院刘孟安教授鉴定为蔷薇科（Rosaceae）悬钩子属（RubusL.）植物茅莓的干燥全草，参照文献[12]中采用正交试验优化的茅莓总黄酮提取工艺分别提取茅莓根、茎、叶中的黄酮。试验动物为SD雄性大鼠，SPF级，体重200g左右，由山东绿叶制药有限公司提供。丙二醛（MDA）测试盒和总蛋白定量测试盒（BCA法）由南京建成生物工程研究所提供，批号分别为20110729

5、、20110804；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH），纯度>96%，由阿拉丁试剂公司提供；Tris碱（AMRESCO）；水（娃哈哈牌纯净水）；乙醇、石油醚（30～6010℃）、浓盐酸、邻苯三酚、邻二氮菲、双氧水等均为国产分析纯。仪器有TU-1901型双光束紫外可见分光光度计、FA1604s型电子天平、KQ-400DB型数控超声清洗器、PHG-9246A型电热恒温鼓风干燥箱、数显恒温水浴锅、台式高速冷冻离心机等。1.2方法1.2.1茅莓总黄酮的提取分别精确称取茅莓根、茎、叶粉末各1.0g，参照文

6、献[12]进行总黄酮的提取。得到茅莓根、茎、叶总黄酮提取率分别为3.02、5.00、12.50mg/g。1.2.2茅莓茎总黄酮对羟自由基（·OH）的清除作用[13]空白对照管：取2.0mL的PBS（pH7.4，下同）溶液和4.0mL蒸馏水于试管中，混匀。未损伤管：取2.0mLPBS溶液、1.0mL邻二氮菲（1.5mmol/L，下同）、1.0mLFeS04溶液（1.5mmol/L，下同）和2.0mL蒸馏水于试管中，混匀。损伤管：取2.0mLPBS溶液、1.0mL邻二氮菲、1.0mLFeS04溶液、1.0m

7、L蒸馏水和1.0mL0.02%H2O2于试管中，混匀。样品参比管：取2.0mLPBS溶液、1.0mL不同浓度（20、40、60、80和100μg/mL）茅莓茎总黄酮提取液和3.0mL蒸馏水于试管中，混匀。样品管：取2.0mLPBS、1.0mL邻二氮菲、1.0mLFeSO4溶液、1.0mL不同浓度（20、40、60、80和100μg/mL）茅莓茎总黄酮提取液和1.0mL0.02%H2O2于试管中，混匀。将上述试管置于恒温水槽中，3710℃保温60min，于波长536nm处测吸光度（A），根据公式（1）计算

8、茅莓茎总黄酮提取液对羟自由基（·OH）的清除率。茅莓根和叶分别按相同方法检测。羟自由基（·OH）清除率=[（A样品-A样参）-（A损伤-A空白）]/（A未损-A损伤）×100%（1）1.2.3茅莓茎总黄酮对超氧负离子（O2-）的清除作用[14]采用邻苯三酚自氧化法[15，16]。取Tris-HCl缓冲溶液（50mmol/L，pH8.2）4.5mL分别与0.4mL不同浓度（2、4、6、8和10μg/mL）茅莓茎总黄酮提取液混匀，室温下放置4m